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实时荧光PCR技术定量检测乳腺癌患者血浆循环DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平。方法用QIAamp血液DNA抽提试剂盒提取61例乳腺癌患者和25例健康妇女血浆循环DNA,用实时荧光定量PCR技术(SYBR Green I染料法)进行定量,结果用设定临界域值时的循环数的值(Ct值)表示,并对定量结果进行ROC曲线分析。结果:乳腺癌患者Ct值(27.71±1.41)显著低于健康对照(30.37±1.32,P<0.001),说明乳腺癌患者血浆循环DNA水平显著高于健康对照组;ROC曲线下面积为0.921。结论应用实时PCR技术检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平有可能成为一种无创性乳腺癌分子诊断方法。 相似文献
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目的 研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTF法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量.结果 塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达.结论 塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌. 相似文献
3.
目的:探讨低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞株的生长以及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用MTT方法观察一定浓度速碧林(低分子肝素钙注射液)作用于SGC-7901细胞12h,24h,48h后细胞的生长情况。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析SGC-7901细胞VEGF mRNA表达的变化,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中VEGF的蛋白表达量。结果:速碧林对SGC-7901细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,速碧林能降低SGC-7901细胞VEGF mRNA以及蛋白的表达。结论:低分子肝素能抑制SGC-7901细胞的生长以及VEGF的分泌。 相似文献
4.
目的: 建立一种连接酶链反应结合荧光PCR的方法,检测结肠癌患者外周血UGT1A1*28基因多态性,并探讨其临床应用价值。方法: 设计连接酶荧光PCR引物和探针,首先通过连接酶反应,然后结合荧光PCR技术检测UGT1A1*28基因多态性,构建标准品评判该体系的特异性和敏感性,并检测50例结肠癌患者外周血标本,与DNA测序进行平行比较。结果: 此方法能准确地区分UGT1A1*28基因TA6/6、TA7/7及TA6/7基因型,且最低可检测5 ng人基因组DNA, 50例结肠癌患者外周血标本的检测结果与测序结果一致。 结论: 连接酶链反应结合荧光PCR可准确检测出UGT1A1*28基因多态性。 相似文献
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目的探讨低分子肝素(LMWH)对胃癌SGC-7901细胞增殖及其人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响。方法不同浓度LMWH作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测细胞hTERT mRNA。结果LMWH作用后,SGC-7901细胞的生长受抑制,呈剂量和时间依赖性,细胞停滞于G1期,其hTERT mRNA表达下降。结论LMWH可抑制SGC-7901细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期、降低hTERT mRNA的表达有关。 相似文献
6.
目的:探讨切除修复交叉互补基(ERCC1)mRNA表达及118 C/T基因多态性与胃癌对奥沙利铂辅助化疗预后的关系.方法:根治术后胃癌患者62例,采用奥沙利铂为主的方案进行辅助化疗.采用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织中ERCCl mRNA水平.采用PCR,LDR(连接酶检测反应)检测ERCCI 118C/T基因多态.结果:62例胃癌组织ERCC1 mRNA表达水平的中位值为0.672;ERCC1 118 C/C、C/T和T/T基因型分别占51.6%(32/66)、43.5%(27/62)和4.8%(3/62).ERCC1 mRNA高表达组(>0.672)无复发生存率和总生存率均显著低于低表达组(P<0.05);携带C/T和T/T基因型患者与C/C基因型患者的无复发生存率和总生存率差异无显著性(P>0.05).多因素分析结果显示ERCC1 mRNA水平是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05),而ERCC1 118C/T多态与预后无关(P>0.05).结论:ERCCI mRNA表达水平与接受奥沙利铂为主辅助化疗胃癌患者的预后有关,可用于其预后预测. 相似文献
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目的 探讨宫颈部位人乳头瘤病毒(HPV)感染与CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞(TReg)及机体免疫水平的关系.方法 采用第二代核酸杂交扩增技术(HC2)检测41例正常对照组、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、42例CIN Ⅱ~Ⅲ和70例感染HPV宫颈癌患者;采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+ CD127-TReg、细胞毒性T细胞(CTL)和NK百分率;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中TGF-β1和INF-γ的含量.结果 ①HPV感染率随着宫颈病变的加重而升高(P =5.75×10^-19);②宫颈CIN Ⅱ~Ⅲ组与宫颈癌组外周血CD4+CD25+CD127-TReg、CTL、NK、TGF-β1、INF-γ与CIN Ⅰ组及正常对照组比较,差异均 有统计学意义(P=1.03×10^-9);且在HPV阴阳性组间比较亦有统计学意义(P=2.33×10^-4);③CTL与NK和Treg呈负相关(P值分别为1.62×10^-6和3.41×10^-5);INF-γ含量与TReg呈负相关(P=2.11×10^-5);④HPV与CD4+ CD25+ CD127-TReg百分率呈正相关(P =3.02×10^-6).结论 宫颈HPV感染与TReg密切相关,TReg失调导致的免疫水平下降可能是宫颈癌免疫逃避机制之一. 相似文献
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目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响.方法:浓度为0 ~ 100 pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-7402 48 h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGF mRNA和CXCR4 mRNA表达.结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0 ~ 100 pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGF mRNA和CXCR4 mRNA的表达.结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达.提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点. 相似文献
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目的:研究血小板衍生生长因子(PDGFs)家族在原发性胃腺癌组织中的表达,阐明其与原发性胃腺癌临床病理特征的关系.方法:选择手术切除并经病理证实的58例原发性胃腺癌癌组织及其对应的癌旁组织标本,采用RT-PCR方法检测组织中PDGF-A、B、C、D mRNA的表达情况,明确PDGF家族在mRNA水平的表达谱;免疫组织化... 相似文献