FasL基因表达对缺氧状态下直肠癌细胞增殖凋亡的影响

Objective To elucidate the effect of FasL gene expression on the proliferation and apoptosis of hypoxic rectal carcinoma cells. Methods The normoxic expression level of FasL in HR-8348 subtype cells (HR-8348B, HR-8348L, HR-8348F and HR-8348As) with different invasive power were verified by Western blot. Hypoxia models for HR-8348B, HR-8348L, HR-8348F and HR-8348As were constructed with chemical modeling, then the FasL levels in all groups at 12 h after hypoxia were quantitated by Western blot. Distribution of different cell life cycles was determined with flow cytometry. Cell reproductive activities were detected with MTT method, and cell apoptesis was assessed with TUNEL. Results FasL protein was pigmentized at the position of 40 000 by Western blot, and the expression level of FasL was significantly higher in HR-8348F cells than those in HR-8348B, HR-8348L and HR-8348As cells(F=361.149, P<0.01) in normoxia. At 12 h after hypoxia, the FasL level was also significantly higher in HR-8348F cells than those in other groups (F=278.766, P<0.01), but was not markedly different as compared to themselves in normoxia (t=1.762, P>0.05). The proliferation index was significantly higher in HR-8348F (60.43±3.72) than those in HR-8348B (40.01±3.30), HR-8348L (41.30±4.06) and HR-8348As cells (35.87±4.39), respectively (F=39.477, P<0.01). However, both inhibition rate of proliferation and apoptotic index were remarkably lower in HR-8348F (17.30±1.98 and 13.10±1.04) than those in HR-834B (33.70±4.33 and 21.60±1.31), HR-8348L (34.20±3.92 and 20.10±1.15), and HR-8348As (38.00±4.55 and 23.90±1.23), respectively (F=28.811 and 76.462, respectively, P<0.01). Conclusion The expression enhancement of intracellular FasL in rectal carcinoma in hypoxia can lead to accelerated proliferation and reduced apeptosis of cells, which will promote tumor cells to adapt microenvironmental hypoxia.     

T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测人CEA

目的 建立检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术.方法 以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入T7RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时进行夹心ELISA方法检测人CEA.结果 成功的建立了检测人CEA的T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术,其检测CEA的灵敏度达2×10 -3 ng/ml,比夹心EL ISA 方法灵敏度高125倍.结论 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较夹心ELISA方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的早期诊断.     

猪苓多糖伍用乙型肝炎疫苗治疗慢性无症状HBsAg携带者半年观察

猪苓多糖伍用乙型肝炎疫苗治疗慢性无症状ＨＢｓＡｇ携带者半年观察李岱，赵建军，管晓江，安萍，兰晓青，张玉范，托乎他什·鲁尔，王洪俊于１９９２年２月至１２月，应用猪苓多糖注射液伍用乙型肝炎疫苗治疗慢性无症状ＨＢｓＡｇ携带者（ＡＳＣ），重点观察ＨＢｅＡｇ／...     

MTT法检测树突状细胞杀伤肿瘤细胞活性的实验研究

目的:用MTT法检测树突状细胞(DC)杀伤肿瘤细胞的活性.方法:将人外周血分离出单个核细胞,在细胞因子的刺激下形成DC,观察其细胞形态、增殖情况,采用MTT法检测DC对肿瘤K562细胞的杀伤活性.结果:DC培养至第1l天时,增殖高达120倍,经MTT法检测证实,DC对K562细胞的4h杀伤活性为3l%.结论:MTT法检测进一步证实了DC对肿瘤细胞有较强的细胞毒作用.     

T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测结直肠癌细胞方法的建立及其意义

目的探讨T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测循环血中结直肠癌细胞的可行性及其价值。方法配制不同浓度的HT29细胞悬液并加入1×107个健康人外周血单核细胞,建立模拟结直肠癌循环肿瘤细胞的模型,从中分离出有核细胞后,加入生物素化抗CEA单克隆抗体(针对Gold抗原决定簇Ⅳ),孵育后加入亲和素-生物素-DNA分子,再加入T7 RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并用RT-PCR检测从模型中分离出的有核细胞中CEA mRNA的表达情况。结果建立了检测结直肠癌细胞的T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术,最低可从1×107个单核细胞中检出5个癌细胞,比RT-PCR最低可从1×107个单核细胞中检出1×102个癌细胞更加敏感。结论T7 RNA聚合酶催化荧光扩增技术可用于检测外周血中的循环肿瘤细胞,是一种敏感的检测结直肠癌细胞的方法。     

组织蛋白酶B与金属硫蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨组织蛋白酶B(CatB)和金属硫蛋白(MT)表达与结直肠癌淋巴结和肝转移的关系。方法采用免疫组化方法检测82例结直肠癌患者原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶组织中CatB、MT的表达,对比分析CatB、MT表达与临床分期和病理类型的关系。结果结直肠癌原发灶、正常肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中CatB表达阳性率分别为48.8%、20.7%、66.7%、59.1%,MT表达阳性率分别为53.7%、26.8%、71.4%、72.7%。结直肠癌原发灶、转移淋巴结和肝转移组织中CatB、MT表达阳性率均高于正常肠黏膜组织。转移淋巴结和肝转移灶中CatB、MT表达阳性率高于癌原发灶和无转移淋巴结组织。Dukes C、D期CatB、MT表达阳性率高于Dukes A、B期(χ2=11.0244、10.9338,P<0.01)。低分化腺癌和黏液腺癌CatB、MT表达阳性率高于高分化和中分化腺癌(χ2=10.9338、10.1148,P<0.01)。结论CatB、MT表达增强与结直肠癌的浸润和淋巴结、肝转移有关,可作为评价结直肠癌患者预后的重要指标。     

结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织相关差异表达蛋白研究

目的探讨结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE),对比分析结直肠癌原发灶、癌旁正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点;采用细胞转染方法,将差异蛋白基因导入结直肠癌细胞,观察细胞生物学行为的改变。结果结直肠癌原发灶与正常肠黏膜组织中蛋白质组分有明显差别。结直肠癌原发灶组织与正常肠黏膜组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为60个。共分析了8个差异蛋白点,其中2个蛋白点在原发灶组织中表达下调,6个蛋白点在原发灶组织中表达上调。经质谱鉴定,碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)在原发性组织中表达下调,醛缩酶A等在原发灶中表达上调。将CAII cDNA克隆转染结直肠癌细胞后,癌细胞侵袭、趋化运动能力及耐药性均明显降低。结论结直肠癌原发灶和正常肠黏膜蛋白质组表达有显著差异,CAⅡ、PDI表达降低和醛缩酶A表达增强可能与结直肠癌的发生相关。     

聚乙二醇干扰素α-2a联合阿德福韦酯对HBeAg阳性慢性乙型肝炎的治疗

目的:分析聚乙二醇干扰素-2a(peginterferon-2a,Peg-IFN-2a)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎应答不佳者联合阿德福韦酯(adefovirdipivoxil,ADV)治疗48 wk的疗效、安全性,并评价48 wk疗效预测指标.方法:140例患者初始均接受Peg-IFN-2a每周1次皮下注射单药治疗,根据24 wk时HBVDNA水平进行分组.A组90例患者治疗24 wk时HBV DNA≥2.0×103IU/mL且HBV DNA下降≥2 log10 IU/mL,其中A1组45例患者加用ADV治疗至48 wk,A2组45例患者继续Peg-IFN-2a单药治疗至48 wk;B组50例患者治疗24 wk时HBV DNA<2.0×103IU/mL,继续Peg-IFN-2a治疗至48 wk.比较各组基线及治疗中HBV DNA、HBsAg、HBeAg及ALT水平.结果:治疗36、48 wk时HBV DNA转阴率B组>A1组>A2组(P<0.01).治疗36 wk时HBV DNA下降值B组>A1组>A2组(P<0.01).48 wk时HBV DNA下降值A1组>A2组(P<0.01),A1、B组之间差异无统计学意义.治疗24-48 wk期间,A1组HBeAg血清转换率升高幅度>A2组和B组(P<0.01).治疗48 wk时HBsAg下降A1组4例、A2组1例、B组2例.治疗36、48 wk时A1与A2、B组ALT复常率差异无统计学意义.A1组治疗48 wk时HBV DNA阴转与治疗36 wk HBVDNA下降值有关.治疗36 wk时HBV DNA较基线下降值对48 wk时HBV DNA阴转的阳性预测值为90.5%,较24 wk时下降值对48 wk时HBV DNA阴转的阳性预测值为95.7%.结论:Peg-IFN-2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎应答不佳者联合ADV治疗提高病毒应答、HBeAg血清转换率,其中治疗36 wk时HBV DNA下降值可预测48 wk疗效.     

乙型肝炎病毒携带者肝组织T淋巴细胞CD28的表达

乙型肝炎病毒（HBV）持续感染与宿主免疫应答低下或形成免疫耐受密切相关,致使乙型肝炎病毒携带者（ASC）对目前的抗病毒药物疗效甚微.为了探讨肝组织T淋巴细胞CD28表达与ASC免疫耐受发病机制的关系,我们采用免疫组织化学（免疫组化）方法检测了80例ASC肝组织中T淋巴细胞CD28的表达情况,现报告如下.