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目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因。方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM—TEasyVector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息。结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4个,ESTs2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个。结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因。 相似文献
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目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因.方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆.将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4 个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个.结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因. 相似文献
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目的:利用 pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(简称为pmirGLO 报告基因载体)构建并鉴定含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR 区报告基因载体(pmir-Insr-3′UTR 及 pmir-mutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝脏 cDNA为模板,PCR 获取目的片段(即含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR区);用PmeI、XbaI双酶切 pmirGLO 报告基因载体和含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体 mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及 pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实 pmir-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体 mRNA 3′UTR 片段。结论成功构建了含 miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体 pmir-Insr-3′UTR及 pmir-mutant-Insr-3′UTR。 相似文献
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目的 观察1~6型蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTs)在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中的表达变化.方法 构建卵清蛋白诱导的E3大鼠急性哮喘模型,分为对照组和哮喘组,每组各10只大鼠,病理及生化检测评估模型构建情况,半定量PCR检测1~6型PRMTs的表达差异.结果 和对照组相比,哮喘组大鼠肺脏组织中PRMT1(P<0.01)、PRMT2(P<0.01)、PRMT3(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达有显著性升高,而PRMT4(P<0.05)的表达显著性降低;哮喘组大鼠脾脏组织中PRMT2(P<0.05)、PRMT5(P<0.05)的表达也出现显著性升高.结论 蛋白精氨酸甲基转移酶在E3大鼠急性哮喘模型肺脏和脾脏中有差异性表达,这可能在哮喘发病的基冈转录后调节过程中发挥着重要的作用. 相似文献
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目的 研究在中国汉族女性中NMDA受体途径重要基因G72与精神分裂症的关系。方法 在545名中国汉族女性(精神分裂症患者260例,正常对照285例)中对位于G72基因的3个单核苷酸多态性位点(rs3916965、rs3916967和rs2391191)进行基因分型和连锁不平衡分析。结果 遗传标记rs3916967的等位基因G(P=0.038 6)和rs2391191的等位基因A(P=0.009 6)均与精神分裂症相关。此外,由3个单核苷酸多态性位点构建的单倍型分析表明,单倍型GAG在病例-对照组中表现出统计学差异(P=0.002 4)。结论 在中国汉族女性中,G72基因是精神分裂症的一个重要易感基因,在后续的研究中有必要对本结果进行进一步的验证。 相似文献
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生物化学开放性实验的设计与要求 总被引:3,自引:0,他引:3
生物化学开展题为“鸡卵类粘蛋白的制备”的开放性实验,为培养学生研究和创新能力奠定了一定的基础,提高了学生分析问题,解决问题的能力。同时,对教师特别是实验技术人员提出了新的要求。 相似文献
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