限制性显示技术在制备丙型肝炎病毒分型芯片探针的应用性研究

目的探讨限制性显示(restriction display,RD)技术在制备丙型肝炎病毒(HCV)分型芯片探针的可行性.方法用限制性内切酶Sau3A I消化HCV1a、1b、2a亚型全长cDNA,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连,通过10个选择性引物进行分组PCR,使得各片段得以扩增并分布于10个亚组中,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离.切胶回收后作3次PCR,得到较纯净的HCV cDNA限制性片段.对这些片段做分子克隆,并测序鉴定.结果由HCV 3个亚型1a、2a、1b的全长cDNA得到66个大小相对均一(200～900bp)的限制性片段,平均每个亚型约22个.测序结果表明,属于HCV基因,可以作为HCV分型芯片的探针.结论RD技术能快速收集大量长度适宜、大小均一的病毒基因片段,适合于分型诊断基因芯片探针的收集.     

碱性成纤维细胞生长因子对牛晶状体上皮细胞增殖的影响及其在牛晶 …

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（bＦＧＦ）在体外对牛晶状体上皮细胞（ＢＬＥＣ） 增殖的影响及确定ＢＬＥＣ是否表达bＦＧＦ蛋白。方法 ＢＬＥＣ原代培养。用不同浓度的bＦＧＦ及＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴＤＲ）处理ＢＬＥＣ３６h后,液闪测定bＦＧＦ对ＢＬＥＣ＾３Ｈ－ＴＤＲ掺入率的。Ｗｅｓｔｅｎ印迹（Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｏｔ）法确 定ＢＬＥＣ是否表达bＦＧＦ蛋白。结果 bＦＧＦ在体外有促进ＢＬＥＣ增殖作用,Ｗｅｓ     

类风湿性关节炎患者血清RA-CP，抗CCP 抗体及RF 检测对RA 的实验诊断意义

目的　分析不同血清类型的类风湿性关节炎（RA）患者血清中的类风湿性关节炎特异性抗原瓜氨酸化蛋白（RACP） 的水平，比较RA-CP 与抗环瓜氨酸多肽（CCP）抗体、类风湿因子（RF）在RA 诊断中的价值。方法　用酶联免疫 吸附法（ELISA）检测103 例RA 患者、71 例其他风湿病患者、105 例健康体检者血清中RA-CP，抗CCP 抗体和RF 的 水平。根据抗CCP 抗体和RF 测定结果将RA 患者分为4 种血清类型:抗CCP 抗体阳性/RF 阳性的RA、抗CCP 抗体 阳性/RF 阴性的RA、抗CCP 抗体阴性/RF 阳性的RA、抗CCP 抗体阴性/RF 阴性的RA，分析各种血清类型RA 患者 血清中RA-CP 的水平。结果　RA 组的血清中RA-CP 浓度水平中位数为4.51（1.80~7.49）单位，高于其他疾病组的0.53 （0.40~0.76）单位和健康对照组的0.52（0.35~0.69）单位。RA-CP，抗CCP 抗体和RF 对RA 的敏感度分别为77.7%， 65.0% 和69.9%，RA-CP 对RA 的敏感度高于抗CCP 抗体和RF（P ＜ 0.05）；特异度分别为95.5%，97.2% 和89.2%。在 4 种血清型的RA 中RA-CP 的检出率分别为100.0%（57/57），40.0%（4/10），100.0%（15/15）和19.0%（4/21）。在抗 CCP 抗体阴性的RA 中RA-CP 的检出率为52.8%（19/36）。结论　血清中RA-CP 对RA 的诊断比抗CCP 抗体和RF 具有 更高的敏感度，可提高类风湿性关节炎的检出率。因此RA-CP 可作为RA 临床诊断的新辅助指标。     

人工智能助力检验医学发展

2017年以来,中国、美国和欧盟先后发布了国家级人工智能（AI）战略发展规划,人类历史即将迎来以“智能化”为主旋律的第四次工业革命。在医疗检验领域,人工智能的理论和技术爆发也将为医学检验理论、方法与应用的发展提供新方向,本文首先从人工智能的理论与实践基础出发,介绍人工智能的发展历程以及算法、数据和算力三大要素的前沿进展,进而结合医学检验的关键应用维度,阐述“AI+检验”的结合创新,包括涉及检验标本处理的标本采集机器人、样本稀释机器人和样本传送机器人;检验项目挖掘如肿瘤标志物和药物基因组学;检验细胞形态学、检验数据处理、辅助诊断模型和互联网医学检验等。随着工业4.0时代的到来,人工智能技术必将推动医学检验从自动化发展到更高阶的智能化阶段。     

高脂血症对血液流变学血浆粘度影响的探讨

目的探讨高脂血症的四种类型对血液流变学血浆粘度的影响。方法测定各型的高脂血症患者和正常对照者的血浆粘度和血脂指标(各50例),并对结果进行统计学分析。结果各型高脂血症患者之间以及与正常对照组的血浆粘度的两两比较均有显著性差异(P<0．01)。结论各类型高脂血症患者的血浆粘度有不同程度的改变,其中以混合型的影响尤为明显,其次为高甘油三酯血症、高胆固醇血症。     

乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片制备的初步实验研究

目的 制备联合检测乙型、丁型肝炎病毒基因芯片并进行杂交验证。方法利用Primer 5.0软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计多对PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术，样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术，得到多个乙型、丁型肝炎病毒特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示，样品和乙型、丁型肝炎诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论利用PCR扩增产物制备乙型、丁型诊断基因芯片是一种快速、简便的实用方法，有着广阔的应用前景。另外，利用限制性显示技术标记样品可为进一步更多种肝炎病毒的混和检测奠定基础。     

siRNA抑制HPV18 E6基因及其对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究特异小干扰RNA(sm all interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap-illom avirus,HPV)18型E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法针对HPV18E6基因设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,利用L ipofectam ineTM2000脂质体转染HeLa细胞,在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR测定HPV18E6 mRNA变化。结果转染siRNA后细胞活力受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,72 h的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示,细胞转染24、48和72 h后HPV18E6 mRNA分别减少了57%、78%和40%,而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

结节性硬化症的癫痫手术治疗对发作及智力影响的研究

目的：探讨结节性硬化症TSC患者手术治疗癫痫对其远期疗效及智力的影响。方法：回顾性分析经手术治疗的9例伴癫痫的TSC患者的临床资料,总结发作症状学、EEG及头颅MRI的特点,随访远期发作的控制情况及智力水平。结果：术后随访24～30个月（平均26．1个月）,EngleI级8例,EngleIV级1例。8例手术治疗有效的患者中,5例智力水平显著提高,IQ平均增高18．2,手术时平均年龄为5．7岁。3例无明显变化,IQ平均增高2．3,手术时平均年龄为20．3岁。结论：在一部分TSC患者,当发作症状、MRI上的结节的部位、EEG痼样放电的部位一致时,手术治疗能有效的控制发作。手术时年龄较小的患者随发作的控制智力改善明显。     

实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌

目的:运用实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌,为早期快速诊断气性坏疽提供新方法.方法:以产气荚膜梭菌16s rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物与探针,将PCR扩增所得产物片段克隆,作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性、重复性及可行性.结果:实时荧光定量PCR法对产气荚膜梭菌的检测具有高度特异性,与创伤弧菌等24种相关细菌等均无交叉反应;检测灵敏度以纯菌计数达9×102cfu/mL,相当于9 cfu/反应;反应体系有较高稳定性;整个操作过程仅需3 h;300例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养结果一致.结论:实时荧光定量PCR法特异、灵敏、快速,适用于产气荚膜梭菌的临床检测及突发事件的批量检测.     

Sysmex UF-1000i全自动尿沉渣分析仪的性能分析及临床应用

目的探讨Sysmex UF-1000i全自动尿沉渣分析仪的临床应用情况。方法分别采用UF-1000i尿沉渣分析仪和显微镜检查法对2 000例临床标本进行检测,对比2种方法的结果,并分析UF-1000i尿沉渣分析仪产生假阳性的原因。结果检测白细胞(WBC),红细胞(RBC),管型和小圆上皮细胞的敏感性分别为99.2%,99.3%,94.7%和95.1%;检测上述成分的假阳性率分别为5.8%、6.1%、10.4%和4.6%;粘液丝、结晶、细菌、酵母菌、小圆上皮、脂肪滴和卵磷脂小体可能影响到UF-1000i对尿有形成分的检测。结论 Sysmex UF-1000i可以有效的检测尿液中的有形成分,当尿液中上述干扰成分呈阳性或增多时,显微镜镜检是十分重要的。