Gab2通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的上皮-间质转化

背景与目的：越来越多的证据显示,Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2,Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关,但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的影响,明确Gab2在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织中Gab2及EMT标记物上皮性钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况并分析其相关性,用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测乳腺组织Gab2的表达情况,采用小干扰RNA(siRNA)技术降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中Gab2的表达,采用划痕实验检测表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后转染细胞的侵袭能力变化,用Western blot检测敲低Gab2后MDA-MB-231细胞中E-cadherin及vimentin的表达情况,同时检测p-GSK-3β的表达情况、转录因子Snail转核情况。结果：Gab2在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin的表达呈负相关,而与vimentin的表达呈正相关(P<0.05);乳腺癌组织中Gab2的表达量明显高于正常乳腺组织;siRNA质粒转染后,SiGab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功,划痕实验显示细胞的侵袭能力减弱,表明Gab2影响乳腺癌细胞系的侵袭能力;敲低Gab2后,MDA-MB-231细胞中的E-cadherin的表达明显升高,而vimentin的表达明显降低;GSK-3β的磷酸化受到抑制,而Snail在敲低Gab2的细胞核中的表达明显下调。结论：Gab2可以通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的EMT,从而促进乳腺癌的侵袭和转移。     

Raptor通过Wnt3a/β-catenin信号通路对乳腺癌侵袭与转移的作用

目的探讨Raptor是否可以通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。方法采用免疫印迹法(Western blotting)检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231(MDA231)中Raptor蛋白的表达情况;采用小RNA(RNAi)干扰技术将质粒转染MDA231,将过表达质粒转染MCF-7;趋化运动实验检测乳腺癌细胞的运动能力;Transwell侵袭实验检测乳腺癌细胞的侵袭能力;Western blotting检测上皮细胞-间充质转化(EMT)标志物的表达情况;核质分离实验检测β-联蛋白(β-catenin)的转核情况。结果 Western blotting法检测结果显示,Raptor在低转移细胞系MCF-7中低表达,而在高转移细胞系MDA231中高表达。转染后,SiRaptor/MDA231细胞组中Raptor蛋白的表达明显下降,MCF-7/Raptor细胞组中Raptor蛋白的表达明显升高,表明转染成功。用Wnt3a刺激处理后,趋化运动和Transwell侵袭实验结果显示,SiRaptor/MDA231细胞组运动和侵袭能力明显降低,MCF-7/Raptor细胞组运动和侵袭能力明显增强。Western blotting法检测结果显示,用Wnt3a和抑制剂Dkk1不同处理后,SiRaptor/MDA231细胞组中上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)上调,波形蛋白(vimentin)下调,细胞核中β-catenin的表达降低,而MCF-7/Raptor细胞组中E-cadherin蛋白下调,vimentin蛋白上调,β-catenin蛋白的表达升高。结论 Raptor能通过Wnt3a/β-catenin信号通路促进EMT的发生,进而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。