用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005相似文献   

AlphaLISA检测新型冠状病毒

目的 建立均相光激化学发光免疫分析方法(AlphaLISA)快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2).方法 采用新型冠状病毒抗体偶联发光微球,生物素标记另一抗体,以及链霉亲和素偶联感光微球构建新型冠状病毒AlphaLISA检测体系.采用SARS-CoV-2真核表达抗原和灭活病毒对AlphaLISA方法进行评价,并与商业化ELISA试剂盒进行比对.结果 确定单抗1#与多抗组别作为新型冠状病毒AlphaLISA检测的抗体对,AlphaLISA对新型冠状病毒抗原的检出限为0.39 ng/ml,具有较好的重复性,批内差1.90％～8.93％,批间差1.75％～9.04％,对不同临床样本的检测具有较好的耐受性,与ELISA试剂盒相比对灭活病毒的检测敏感性更高.结论 AlphaLISA可实现对SARS-CoV-2的高效快速检测.     

超抗原葡萄球菌肠毒素A对肝癌细胞免疫原性影响的研究

目的给肝癌细胞转入超抗原分子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的编码基因,使其表达这种毒素分子,以增强肝癌细胞的免疫原性,达到增强肝癌细胞诱导免疫排斥反应的目的.方法构建SEA编码基因的逆转录真核表达载体,转染病毒包装细胞系PA317后,行滴度测定.以高滴度克隆培养上清转导肝癌细胞株HHCC,筛选获得阳性表达株.然后利用外周血混合淋巴细胞进行杀伤实验.结果成功的构建了SEA的逆转录真核表达载体pLXSN-SEA,转导肝癌细胞后,获得表达SEA分子的阳性克隆HHCC-SEA.培养上清中SEA含量在pg的水平.外周血混合淋巴细胞杀伤实验结果显示,T淋巴细胞对转导后肝癌细胞的杀伤率可达45.6%.高于对HHCC 20.7%的杀伤率,T细胞对转导后肝癌细胞杀伤反应的Km值为5.18×104,而HHCC组的Km值为2.92 × 105,与前者的差别有统计学意义.结论肝癌细胞在转入SEA分子的编码基因后,表达出微量的SEA蛋白,却具有较强的免疫激活能力.即表达SEA的肝癌细胞在很低的浓度下,激活的T细胞即可对其达到最大杀伤反应速度,对T细胞的激活能力远远高于HHCC.     

C3aR拮抗剂治疗PR8/MRSA共感染小鼠肺炎损伤的研究

目的 补体异常激活可大量产生过敏毒素C3a分子,通过利用C3aR受体拮抗剂(C3aRa)可抑制C3a功能,达到治疗流感病毒和金黄色葡萄球菌(PR8/MRSA)共感染小鼠肺炎损伤的目的 ,探究一种治疗共感染重症肺炎损伤的新策略.方法 PR8/MRSA共感染小鼠尾静脉注射C3aR受体拮抗剂C3aRa,剂量1 mg/kg,1次/2 d,观察记录小鼠死亡率变化;测量共感染小鼠体质量,取新鲜肺组织称重,计算肺指数;制备小鼠肺组织石蜡切片并行HE染色,观察肺部病理改变.结果 经过敏毒素受体拮抗剂C3aRa干预后的共感染小鼠较对照组生存率提高了30％,肺组织充血、水肿和出血程度减轻,肺指数明显下降(P＜0.001).结论 C3aRa在流感/细菌共感染重症肺炎的治疗中具有一定疗效,为临床利用补体干预治疗共感染重症肺炎提供了一种新策略.     

2型猪链球菌毒力因子研究进展

猪链球菌（Streptococcus suis）是革兰阳性兼性厌氧球菌，根据其荚膜多糖抗原性的差异分为35个血清型，其中2型（Streptococcus suis type2，SS2）是毒力最强、危害最严重、流行最广泛的血清型之一，可引起猪败血症、脑膜炎及急性死亡，并可导致人感染，甚至死亡。然而，2型猪链球菌广泛存在于正常猪的呼吸道中，猪群是否会发生猪链球菌病与其带菌率的高低无直接的关系，     

猪链球菌胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控

目的:研究猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控.方法:采用免疫荧光、实时定量PCR、Western blot等方法从基因转录和表达水平研究SSU05 _0272对人脑微血管内皮细胞β-catenin的调控.结果:实时定量PCR结果显示SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的表达;免疫荧光和免疫印迹结果也显示,SSU05_0272蛋白能下调β-catenin在人脑微血管内皮细胞中的含量.结论:SSU05_0272调控人脑微血管内皮细胞β-catenin的表达.     

基底动脉分叉动脉瘤的治疗进展

颅内动脉瘤( Intracranial aneurysms ,AN)指脑血管异常导致局部血管瘤样突起,是自发性蛛网膜下腔出血的最多见原因,发病率为1 ％～5 ％[1-2].该病在脑血管意外中居于第3位,但其病死率、致残率极高,病死率约为40 ％～50 ％.基底动脉分叉动脉瘤( Basilar bifurcation aneurysm , BBA )约占AN的5％,是后循环中最常见的动脉瘤[ 3-4 ].BBA 位置深,破裂后会导致脑组织水肿,四周穿支动脉多,周围结构较复杂,造成夹闭动脉瘤的难度大.BBA大多数患者可以通过血管内治疗动脉瘤,但栓塞后的动脉瘤可能出现再通、复发和蛛网膜下腔出血等致命的并发症.对于瘤颈巨大、较宽及动脉瘤顶部特殊朝向的动脉瘤仍需要手术治疗[4].