糖尿病患者中性粒细胞运动功能及药物对其影响

用改进的Boyden小室对糖尿病患者的中性粒细胞运动功能进行了研究。结果表明10例患者的中性粒细胞运动功能都有不同程度的下降。又用药物来提高已降低的中性粒细胞运动功能,两种药物中有一种获得阳性结果。     

卡介苗活化的CD1-限制性细胞毒T细胞的抗膀胱癌效应

为研究卡介苗（BCG）活化的T细胞亚群在抗膀胱癌效应中的作用，通过细胞因子（IL－4与GM－CSF）体外诱导而获得高表达CD1分子的抗原提呈细胞，然后用BCG抗原致敏抗原提呈细胞以激活各T细胞亚群，比较BCG活化的T细胞亚群对膀胱癌细胞株T24生长抑制效应。结果表明：BCG活化的CD1－限制性T细胞具有明显的抗瘤活性，CD4^ T细胞和γδT也发挥抑制瘤细胞生长的作用。该研究结果提示具有非特异免疫功能的T细胞亚群在BCG抗膀胱癌效应中发挥重要作用。     

利用噬菌体环肽库筛选可溶性肿瘤坏死因子受体1的特异性结合肽

目的 应用噬菌体环肽库筛选肿瘤坏死因子α(TNF-α)的模拟肽，为研制模拟TNF-α的新型多肽药物奠定基础。方法 用亲和纯化的可溶性TNF受体1(sTNFR1)作为筛选配基，对噬菌体随机环肽库进行亲和筛选，利用胞毒效应进行生物学筛选，并进一步对某些阳性克隆进行序列测定和分析。结果 经3轮筛选，每轮的投入／产出比逐轮提高，说明筛选具有良好的富集效果。并得到模拟跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)、可溶型TNF-α(S-TNF-α)的模拟肽和拮抗TNF作用的sTNFR1封闭肽。获得了TM-TNF-α的模拟肽的氨基酸序列的基序。结论 获得的模拟TM-TNF-α生物学效应的sTNFR1结合肽，可望发展成为一种新的TNF-α肽类新药。     

重组肿瘤坏死因子-α抗血清对大鼠实验性结肠炎的影响

目的 探讨灌胃给予肿瘤坏死因子-α(TNF-α)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法 以50mg／kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔，复制大鼠溃疡性结肠炎模型；用兔抗人TNF-α多克隆抗体血清10mg／kg给大鼠灌胃，观察一氧化氮(N0)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及TNF-α在大鼠溃疡性结肠炎组织中的表达。结果 抗TNF-α多克隆抗体治疗可明显减轻溃疡性结肠炎的病理改变，抑制局部结肠组织NO的产生、MPO活性以及TNF-α表达。结论 抗TNF-α血清通过中和TNF-α，可抑制溃疡性结肠炎结肠组织表达TNF-α及炎性介质的释放，从而减轻溃疡性结肠炎的病理损伤。     

TNF受体封闭肽对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法：用NBT的方法检测呼吸爆发；用RT—PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL-1β mRNA和TNF-α mRNA水平；用Western blot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF-kBp65核转位。结果：TNF受体封闭肪可完全拮抗TNF-α诱导大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发，明显抑制TNF-α诱导的IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的转录，使腹腔巨噬细胞TNF-α诱导的NF-kBp65核转位明显减少。结论：TNF受体封闭肽在体外能有效抑制TNF-α诱导的大鼠腹腔巨噬细胞功能。     

NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关

的研究SNAP-23蛋白在NK细胞系NK92细胞胞吐效应中的作用，探讨NK细胞胞吐的分子机制。方法利用已糖氨酶(β-hexosaminidase)释放实验检测NK细胞的胞吐作用。通过RT-PCR和Western blot显示NK92细胞中SNAP-23a mRNA和蛋白的表达，利用激光共聚焦显微镜扫描术确定靶细胞触发前后SNAP-23a在NK92细胞中的定位。结果NK细胞的胞吐作用在靶细胞刺激后2h明显，4～6h达高峰；NK92细胞组成性表达SNAP-23a mRNA和蛋白，靶细胞刺激前后蛋白表达量虽无明显差异，但其定位发生了显著改变：激光共聚焦显微镜扫描结果显示在静息NK92中SNAP-23a主要表达在胞浆内的颗粒上，经靶细胞刺激后逐渐向细胞膜发生转位，2h明显转位，4～6h几乎完全转位。结论NK细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关。     

跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸部分缺失对细胞毒作用影响

目的　探讨跨膜型肿瘤坏死因子 (TM TNF)信号肽在其杀瘤中的作用。方法　用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质 ,分别获得TM TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第 73～ 4 7、 73～ 34、 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失的TM TNF体外翻译蛋白。用MTT法检测其对HL 6 0细胞的杀伤率。结果　 34～ 1、 2 1～ 1位氨基酸缺失可提高TM TNF对HL 6 0细胞的杀伤 , 73～ 4 7位氨基酸缺失对其杀瘤力无明显作用 ,而 73～ 34位氨基酸缺失可使其杀瘤率明显下降。结论　去除信号肽胞外段可提高TM TNF α对HL 6 0细胞的杀伤率 ,而TM TNF α信号肽 4 7～ 34位氨基酸在其杀瘤过程中有重要作用。     

Syntaxin 4蛋白在NK细胞中的表达及与SNAP-23蛋白的相互作用

目的　研究NK细胞中与囊泡分泌有关的膜蛋白syntaxin 4的表达和与其它蛋白的相互作用 ,为进一步研究NK细胞免疫效应的分泌调节分子机制提供新思路。方法　RT PCR和免疫印迹方法检测人类NK细胞syntaxin 4的表达 ,免疫荧光显微镜观察静息状态和经靶细胞激活后syntaxin4蛋白在NK92细胞中表达和分布的变化 ,免疫共沉淀检测syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白的相互作用。结果　人类NK细胞中在mRNA水平和蛋白质水平均有syntaxin 4组成性表达 ,蛋白产物主要分布在细胞膜上。异种靶细胞刺激后 ,syntaxin 4蛋白有明显的细胞内定位变化和极化现象。syntaxin 4蛋白和SNAP 2 3蛋白有较强的相互作用。结论　syntaxin 4蛋白与NK细胞对靶细胞的识别过程有关 ,并与胞内膜交换相关分子SNAP 2 3蛋白相互作用 ,可作为研究干预移植排斥反应中杀伤性胞吐的新目标分子。     

抗人跨膜型肿瘤坏死因子-α多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备特异的能区分人跨膜型肿瘤坏死因子（TM—TNF—α）和分泌型肿瘤坏死因子（sTNF—α）的多克隆抗体。方法借助抗原肽预测软件对TM—TNF—α的抗原表位进行预测，合成TM—TNF—α特异的20个氨基酸的多肽，将之与匙孔碱血蓝蛋白（KLH）耦联。BALB／c小鼠皮背部多点注射，收集分离血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术鉴定其特异性。结果成功免疫BALB／c小鼠，ELISA证实该抗血清与免疫多肽有良好的结合，而与sTNF-α、白细胞介素-2（IL-2）和γ-干扰素（IFN-γ）无交叉反应，流式细胞术显示该抗血清可与细胞系U937表达的TM—TNF—α发生特异性结合。结论成功制备了TM—TNF—α特异性多克隆抗体。为制备TM—TNF—α特异性单克隆抗体莫定了基础，为区分TM—TNF—α和sTNF—α的生物学作用提供了有力的工具。     

两型TNF-α对HL-60细胞毒效应及其机制研究

目的前期研究表明，膜型TNF-α较分泌型TNF-α具有更强和更广的细胞毒作用，本研究拟进一步研究两型TNF-α介导胞毒效应的差异。方法采用对两型TNF-α反应性不同的HL-60为靶细胞；MTT法检测两型TNF-α对HL-60的胞毒活性；RT-SSCP法检测p53基因；通过检测荧光素酶报告基因表达水平，反映NF-kB活性的变化。结果TM-TNF可以有效杀伤HL-60，S-TNF则不能。S-TNF诱导HL-60的NF-kB活性升高，TM-TNF则不能诱导HL-60的NF-kB活性升高。同时我们发现HL-60细胞的p53基因是突变的。结论HL-60细胞对S-TNF胞毒作用耐受，对TM-TNF敏感；此种差异可能在于TM—TNF能够有效抑制NF-kB的激活，进而下调突变p53基因，最终导致其抗凋亡效应减弱，杀伤效应增强，其具体机制有待深入研究。