鸭乙肝病毒对O^6—AT酶活性作用的研究

流行病学调查资料表明,人肝癌的发生与乙型肝炎病毒感染密切相关。然而不能排除肝癌的发生是多因素的综合作用。显然对病毒和化学致癌物诱发肝癌的综合作用作系统的研究颇为重要。众所周知,亚硝胺类化合物广泛地存在于人类的环境中,硝酸盐、亚硝酸盐和某些含氨化合物通过胃液能合     

启东县、青浦县鸭肝中O~6—甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活力比较

O~6—甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O~6—AT)厂是体内修复酶,特异性地修复O~6-烷基化鸟嘌吟,这一具有前致变性的结构,其值的高低在一定程度上可反映机体对某些亚硝胺类化合物的敏感性。本文报道了测定肝癌高发区江苏省启东县和肝癌相对低发区上海市青浦县二个地区鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染阳性与阴性的鸭肝中O~6—AT活性,结果显示启东鸭肝的O~6—AT酶活性明显低于青浦的。提示启东家鸭对亚硝胺类物质比较敏感。这可能和启东鸭肝癌的高发有关系。     

肝癌细胞中WIF-1的甲基化状态分析

目的探讨WIF-1基因在肝癌细胞中的甲基化状态及其与蛋白表达的关系,并初步研究了WIF-1与肝癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和测序方法分析了9种肝癌细胞系中WIF-1启动子区的甲基化状态,用RT-PCR检测了其mRNA的表达。用去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理肝癌细胞株并分析其mRNA和蛋白的表达的变化。结果6种肝癌细胞中检测到异常的甲基化,甲基化率为66.7%。在用5-Aza-CdR处理细胞后,WIF-1表达缺失的肝癌细胞系不同程度地恢复了表达。MTT法分析发现WIF-1对SMMC-7721(7721)细胞生长有较为显著的抑制效果。结论推断WIF-1启动子区频繁甲基化的现象可能是它在肝癌中表达沉默的主要机制,并在肝癌的发生发展起作用。     

肝癌DKK1基因的表达及突变分析

目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。     

原发性肝癌患者乙型肝炎病毒基因型与突变的地区性差异分析

目的 研究原发性肝癌患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型、亚型和突变的地区性差异.方法 HBV阳性的原发性肝癌组织标本80例,其中广西地区20例,上海、浙江、江苏(长三角地区)60例.应用聚合酶链反应(PCR)扩增患者携带的HBV DNA序列,PCR产物直接纯化测序.用NCBI在线的软件viral genotyping tool确定HBV基因型,MEGA(Molecular Evolutionary Genetics Analysis,version 3.1)软件构建系统进化树和进行亚型分型及突变分析.结果 80例肝癌标本中,17例为B基因型(21.3%),57例为C基因型(71.3%),6例为B、C基因型混合感染(7.5%).对17例B基因型和57例C基因型的亚型分型,其中B基因型的亚型全部为B2型,C基因型的亚型有C1、C2、C5等三型,其中有12例为C1型(21.1%),44例为C2型(77.2%),1例为C5型(1.8%).广西地区的C1亚型35%(7/20)明显高于长三角地区的C1亚型8.5%(5/60),而广西地区的C2亚型20%(4120)明显低于长三角地区的C2亚型66.7%(40160).两地区HBV基因亚型分布在统计学上有显著差异.比较两地区的HBV序列还发现,广西地区B基因型CP区T1762/A1764呈现更高的突变性,有6例(100%)存在突变,而长三角地区只有2例(16.7%).结论 两地区原发性肝癌患者的HBV亚型分布和基因型B的CP区T1762/A1764突变率有显著差异.     

鸭乙型肝炎病毒对肝脏细胞色素P450含量的影响

流行病学调查表明乙型肝炎病毒与人类肝癌的发生有密切关系。有些化学致癌物可以引发动物肝癌,如黄曲霉毒素已被列为人类的致癌物。乙型肝炎病毒与肝致癌物对肝癌是否有协同或相加作用,尚不清楚。 环境中存在的致癌物,包括肝致癌物,大多是间接致癌物,需经细胞色素P450代谢活化成亲电子     

THE ACTIVITY OF 0~6-METHYLGUANINE DNA METHYL-TRANSFERASE IN LIVERS OF DUCKS FROM QIDONG AND QINGPU

O6-methylguanine DNA methyltransferase (O6-AT) is an enzyme for the repair of the promutagenic structure, O6-aIkylguanine, from alkylated DNA, therefore low activity of O6-AT is involved in the predisposition of tissues to some nitrosamines and the development of cancer. The levels of O6-AT in livers of ducks from Qidong (Qd), a high incidence area of liver cancer, and from Qingpu(Qp), a relatively low incidence area were determined in this study. The results showed that the activity of O6-AT was higher in Qp than in Qd. It suggested that some nitrosamine in Qd might be one of factors responsible for the higher incidence of ducks liver cancer, because these ducks were more sensitive to nitrosa-mine.     

细胞生长相关新基因PP3105的克隆及其初步功能研究

目的 新基因PP3105的克隆及其初步功能研究。方法 分离和克隆新基因PP3105的全长序列，在生物信息学分析的基础上，采用克隆形成、亚细胞定位、生长曲线等实验对该基因进行初步功能研究。结果 实验表明PP3105有两个不同的转录本，并表现出一定的组织特异性；染色体定位于4q22-24；蛋白定位于细胞膜和细胞浆中；克隆形成实验显示有明显的体外集落抑制作用；生长曲线实验表明PP3105在SMMC7721细胞中的表达对细胞增殖有抑制作用。结论 新基因PP3105可能是一个新的金属离子尤其是锌的转运蛋白，并且与肝癌细胞的生长、增殖相关。     

非放射性PCR-LIS-SSCP技术快速分析肝癌患者p53基因249位密码子的突变

目的应用非放射性PCR-LIS-SSCP方法快速分析肝癌患者p53基因第249位密码子突变.方法采用PCR-LIS-SSCP方法,研究了16例来自中国广西、江苏启东和上海地区肝癌患者p53基因第249位密码子的突变情况,并用限制性内切酶和DNA测序对PCR-LIS-SSCP方法所获得的结果进行了验证.结果从16例肝癌病人中检出3例在该位点具有突变.其中广西地区的4例肝癌病人有1例发生突变,江苏启东地区的4例肝癌病人有1例发生突变,上海地区的8例肝癌病人有1例发生突变. 结论用该方法检测肝癌病人p53基因第249位密码子突变频率为18.8%(3/16),为该方法应用于候选新基因的未知突变研究奠定了基础.     

CTHRC1基因在人肝癌中高表达并促进MHCC97L肝癌细胞的转移

目的：分析CTHRC1基因在人肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况及其对MHCC97L肝癌细胞转移能力的影响。方法：采用northem blot、RT—PCR和荧光定量PCR分析人肝癌组织和肝癌细胞株中CTHRC1 mRNA水平。构建包含CTHRC1基因编码框的真核表达载体pCMV-3Tag-CTHRC1，通过体外实验分析CTHRC1在MHCC97L细胞中过表达对MHCC97L细胞迁移、侵袭等转移能力的影响。结果：Northern blot、RT—PCR和荧光定量PCR结果显示，14例肝癌患者中11例存在癌组织CTHRC1 mRNA表达水平高于癌旁组织，8种肝癌细胞株中5种肝癌细胞株存在着CTHRC1的高表达。当CTHRC1过表达后，MHCC97L细胞的迁移及侵袭能力显著增强（P〈0．001）。结论：CTHRC1基因在人肝癌组织和人肝癌细胞株中存在着高表达，同时该基因可使肝癌细胞MHCC97L的转移能力明显增强，提示CTHRC1基因可能在肿瘤转移中起重要作用。