新疆家蚕抗菌肽诱导人胃癌细胞AGS凋亡的研究

目的探讨新疆家蚕抗菌肽(cecropin XJ)是否通过诱导人胃癌细胞AGS凋亡产生抗肿瘤的作用。方法选择0.01~1 000 mg·L-1浓度范围内的cecropin XJ与人胃癌细胞AGS和人正常胃上皮细胞GES-1共培养24 h,采用MTT法检测cecropin XJ对AGS细胞和GES-1细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构变化;Hoechst染色观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧和线粒体膜电位的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3以及细胞色素C mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 Cecropin XJ在体外能明显抑制胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),并具有浓度依赖性,IC50值为61.19 mg·L-1,但对GES-1细胞无明显的抑制增殖作用。经cecropin XJ处理24 h后,AGS细胞核固缩,呈现典型细胞凋亡特征,同时细胞内活性氧增加,线粒体膜电位下降。qRT-PCR和Western blot结果表明,cecropin XJ能够引起Bcl-2表达下调,Bax表达上调,促进细胞色素C的释放并活化caspase-3。Cecropin XJ促进caspase-3活性呈剂量依赖,经caspase-3和caspase-9特异性抑制剂处理后可降低cecropin XJ介导的AGS细胞死亡率。结论 Cecropin XJ可通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达和活化caspase-3诱导AGS细胞凋亡,是其抗肿瘤机制之一。     

隐丹参酮对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞的生长抑制作用与机制研究

本研究探讨了隐丹参酮(cryptotanshinone, CPT)对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF7-TAMR的抑制作用及机制。采用MTT法检测CPT对MCF7-TAMR细胞的生长抑制作用,发现CPT剂量与时间依赖性抑制MCF7-TAMR细胞的生长, 24 h半数抑制浓度(IC₅₀)为15.14±2.82μmol·L^-1。CPT可阻滞细胞周期于G0/G1期,并通过上调细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平促进细胞凋亡。Transwell结果显示CPT对MCF7-TAMR细胞的迁移有显著抑制作用。此外, CPT降低了MCF7-TAMR细胞来源微球体中CD24^-/lowCD44⁺细胞群。Western blot结果证明, CPT有效抑制雌激素受体-α (estrogen receptor α, ER-α)磷酸化,抑制磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K-p85)与丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine ...     

新疆家蚕抗菌肽联合多种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

【目的】研究新疆家蚕抗菌肽联合4种化疗药物对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响。【方法】应用MTT法检测新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与不同浓度阿霉素(Doxorubicin,DOX)、卡铂(Carboplatin,CBP)、顺铂(Dichloro-Diamineplatinum,DDP)、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)联合,对人食管癌Eca109细胞增殖的影响;流式细胞仪分析新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与D0X、CBP、DDP、CTX联合,对Eca109细胞凋亡,活性氧水平及线粒体膜电位的影响。【结果】新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与化疗药物DOX、DDP、CTX分别单独用药或联合用药均可抑制Eca109细胞的增殖作用,联合用药组与各药物单独处理组相比,细胞凋亡率,活性氧水平及线粒体膜电位均具有显著性差异（P<0.05）。【结论】在体外实验中,抗菌肽与化疗药物DOX、DDP和CTX联用对Eca109细胞具有增殖抑制作用和凋亡诱导作用。新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ与DOX、DDP和CTX联合作用Eca109细胞具有协同作用,而与CBP联合作用Eca109细胞则具有拮抗作用。     

隐丹参酮对人乳腺癌MCF7细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨隐丹参酮(CPT)对人乳腺癌MCF7细胞的抑制作用及机制。方法 MTT法检测CPT干预后MCF7细胞存活率,AnnexinV/PI实验、Hoechst33258荧光染色实验检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期及细胞内活性氧ROS;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭;微球体培养及流式细胞术检测微球体表面分子CD44与CD24;Western blot检测细胞相关蛋白的表达。结果 CPT呈剂量依赖性地抑制MCF7细胞增殖,24h半数抑制浓度(IC₅₀)为19.24μmol/L。与未加药处理组相比,CPT处理组可将细胞周期阻滞于S期,并诱导细胞凋亡。细胞划痕实验和Transwell小室结果表明,CPT对MCF7细胞的迁移与侵袭有显著抑制作用。此外,CPT降低了MCF7细胞来源微球体中CD24^-/lowCD44⁺细胞群。Western blot结果证明,CPT能明显上调Bax蛋白表达,下调Bcl2、PI3K-p85、Akt、N-cadherin、Twist1、Sox2、Oct4、Nanog蛋白表...     

乌拉尔甘草醇提物抑制树突状细胞成熟及治疗哮喘的作用

目的研究乌拉尔甘草醇提物(GUEE)对树突状细胞(DC)成熟的调节作用及在na?ve BALB/c小鼠和卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型中对OVA的佐剂效应。方法制备GUEE, 体外检测不同浓度GUEE对DC成熟及其分泌的细胞因子的影响, 以及对细菌脂多糖(LPS)诱导的DC成熟的影响。采用显微镜观察GUEE对小鼠骨髓来源DC形态变化, 流式细胞术检测DC表面分子表达水平, 酶联免疫吸附测定(ELISA)检测DC培养上清中白细胞介素IL-1β(IL-1β)、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。通过脚掌注射不同浓度GUEE, 24 h后分离引流淋巴结, 流式细胞术检测DC成熟状态。与OVA联合免疫na?ve小鼠, 流式细胞术检测调节性T细胞(Treg)的变化。建立OVA蛋白诱导的小鼠哮喘模型, 研究GUEE作为耐受佐剂是否对哮喘小鼠有抗原特异性的治疗作用。采用苏木精-伊红染色法(HE)和过碘酸雪夫染色(PAS)检测肺组织病理学变化, ELISA检测血清中抗体水平, 流式细胞术检测脾脏中Tregs及CD4+ T细胞表达干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4的水平。结果...     

中亚苦蒿提取物对树突状细胞成熟及功能的影响

目的:探讨中亚苦蒿硅胶柱分离组分（AEM-SC）对小鼠树突状细胞（DC）成熟及免疫功能的影响。方法:制备中亚苦蒿大孔吸附树脂70%乙醇洗脱组分,经硅胶柱进一步分离得到洗脱组分AEM-SC,并对其多糖、总黄酮、三萜类含量进行测定。流式细胞术检测AEM-SC对DC表面分子表达水平、抗原吞噬能力及刺激同种异体T细胞增殖能力的...     

新疆家蚕抗菌肽与化疗药物联用对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究新疆家蚕抗菌肽（cecropin-XJ,CE-XJ）与4种化疗药物联用对人食管癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT法检测CE-XJ联合不同浓度的多柔比星（doxorubicin,ADM）、卡铂（carboplatin,CBP）、顺铂（cisplatin,DDP）和环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）对人食管癌Eca109细胞增殖的影响,流式细胞术分析CE-XJ与ADM、CBP、DDP、CTX联用对Eca109细胞凋亡、活性氧及线粒体膜电位的影响。结果：单独使用CE-XJ（1～50 μmol/L）可依剂量依赖方式显著抑制Eca109细胞的增殖（ P <0.05或 P <0.01）。CE-XJ分别与ADM、DDP、CTX联合用药, 与单独用药相比,Eca109细胞的增殖抑制明显加强、细胞凋亡率显著增加（均 P <0.05或 P <0.01）,细胞内活性氧水平显著增加（ P <0.05）,而线粒体膜电位显著降低（均 P <0.05）。但CE-XJ与CBP联用时出现拮抗现象,与单独用药相比,细胞增殖抑制变化不大,细胞凋亡率反而降低。结论：CE-XJ与化疗药物ADM、DDP和CTX联用对人食管癌Eca109细胞的增殖抑制和凋亡诱导有明显促进作用,其机制可能与细胞内活性氧和线粒体膜电位变化有关。但CE-XJ与CBP联用则起拮抗作用,其机制有待进一步探讨。     

新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ对荷瘤小鼠免疫系统的影响

目的:抗菌肽是生物防御系统中产生的一类对抗外源性病原体的肽类物质,是生物体内固有的、非特异性免疫系统的重要组成部分。在动物模型及人体中,免疫系统在控制肿瘤方面具有重要作用。本文通过建立BALB/c荷瘤小鼠模型,探讨新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ对人食管癌Eca109细胞荷瘤小鼠是否通过影响机体免疫应答发挥抗肿瘤作用。方法:通过免疫组化和流式细胞术等方法检测免疫应答相关细胞因子和DC表面分子的表达。结果:10 mg/kg CecropinXJ对Eca109细胞移植瘤具有显著的抑制作用。10 mg/kg CecropinXJ给药组肿瘤体积和肿瘤重量与生理盐水对照组相比,具有显著差异(P<0.05)。同时,CecropinXJ可抑制肿瘤组织癌细胞的浸润生长而对小鼠体内脏器无影响。在CecropinXJ抑制肿瘤生长过程中,VEGF和b FGF上调表达。与对照组相比,CecropinXJ对荷瘤小鼠的抑瘤作用不能够显著促进CD4、IL-4和IFN-γ的表达,同时也不涉及脾脏中DCs表面分子的表达(P>0.05),但对TNF-α的表达具有显著的促进作用(P<0.01)。结论:CecropinXJ可以显著抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长,在该过程中,可能并不通过影响机体免疫应答发挥抗肿瘤作用。