食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5’端转录调控区的克隆及其顺式作用元件定位分析

目的：从食管癌细胞SHEEC中克隆NGAL基因5’端转录调控区并进行顺式作用元件定位分析。方法：采用PCR法克隆NGAL基因5’端转录调控区，并通过NCBI公共数据库BLAST序列分析鉴定突变。应用KEGG序列数据库对该调控区进行顺式作用元件定位分析。结果：从SHEEC中获得了NGAL基因5’端转录调控区-1124— 65区段的克隆，该区段序列有3处点突变，在NGAL基因-1124— 65区段共鉴定出78个有效顺式作用元件位点。结论：多种反式作用因子可能是永生化食管上皮细胞恶性转化中NGAL基因转录增强的重要调控因素。     

食管癌相关功能未知基因的电子克隆延伸与ncRNA的发现

背景与目的:运用电子克隆等生物信息学方法研究筛查出的镐个与食管癌相关功能未知的DNA序列片段,为食管癌相关研究提供指导.材料与方法:以48个DNA序列片段为核心,运用BioEdit建立本地数据库;通过电子克隆的方法对48个DNA序列中功能未知的基因片段进行序列延伸;通过BLAST同源分析搜索48个基因的内含子以及上下游基因间隔区中存在的非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA).结果:48个DNA序列中功能未知的基因片段通过电子克隆的方法平均能够延伸190 bp以上;在48个基因的内含子以及上下游基因间隔区存在着与已知ncRNA相似性很高的片段.结论:运用电子克隆的方法可以使某些食管癌相关功能未知基因的序列得以明显延伸;一些食管癌相关基因所在的染色体区段存在着某些与ncRNA高度相似的片段,这提示我们,ncRNA可能参与食管癌的发生过程,其具体功能有待深入研究.     

食管癌细胞 SHEEC中NGAL基因 5′-UTR和 3′-UTR的克隆与鉴定

背景与目的 : NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)基因是 lipocalin家族的一个新成员 . 以往我们曾研究发现 NGAL基因在 TPA诱导永生化食管上皮细胞 SHEE向食管癌细胞 SHEEC恶性转化的过程中显著过表达 , 但表达调控机制不清楚 . 本研究拟从 SHEEC细胞中克隆 NGAL基因的 5′ -UTR和 3′ -UTR( untranslated region) 并进一步明确其结构特征 . 方法 : 采用 RACE方法从 SHEEC细胞中克隆 NGAL基因的 5′ -UTR和 3′ -UTR; 在测序基础上进行 BLAST分析鉴定 . 结果 : 结合以往的实验结果 , 从 SHEEC细胞中克隆了 NGAL基因的 69 bp 5′ -UTR和 147 bp 3′ -UTR, 而且序列分析未发现突变 . 结论 : SHEEC细胞中的 NGAL基因具备完整的 5′ -UTR和 3′ -UTR结构 .     

食管癌患者血清中NGAL蛋白含量检测及其临床意义

目的:探讨食管癌患者血清中NGAL蛋白的含量及其临床意义。方法:双抗体夹心ELISA法检测97例食管癌患者和85名正常人血清中NGAL蛋白的含量。联合Western blot和免疫荧光技术检测5种食管癌细胞系表达NGAL蛋白的异质性情况。结果:97例食管癌患者血清中NGAL蛋白含量为(5.94±2.86)μg/L,85名正常人为(4.94±2.58)μg/L,差异有统计学意义,P=0.015。实验数据散点分布结果表明,血清NGAL蛋白含量最高值亚群属于食管癌患者,最低值亚群属于正常人;而多数数据相互交叉。Western blot和免疫荧光检测结果一致,表明SHEEC、EC18和EC8712与EC109和EC171相比,前3种食管癌细胞系表达NGAL蛋白的水平明显高,提示食管癌细胞表达NGAL蛋白异质性明显。结论:食管癌患者血清中NGAL蛋白的含量明显高于正常人。因为异质性所致,通过检测血清中NGAL蛋白含量来判定食管癌的发生发展,其临床意义是有限的。     

miR-21与肿瘤

MicroRNA（miRNA）是一类具有调控功能的小分子非编码RNA,主要参与基因转录后水平的调控,对生物体的生长、发育、衰老和死亡等生命过程都有着重要的作用。近年来,大量研究结果表明,许多miRNA可作为原癌基因或者抑癌基因,在肿瘤的发生和发展中扮演着重要的角色,其中miR-21最受人重视。大量实验证明在多种肿瘤细胞中,miR-21的表达均出现显著异常,揭示miR-21作为一个致癌miRNA,在多种肿瘤的发生和发展中起着重要的作用。本文综述了miR-21在肿瘤细胞中调控的靶基因及其功能,以及miR-21自身的表达调控机制研究进展,这将为miR-21在肿瘤的诊断、治疗和预后判断中的应用提供重要资料。     

建立在芯片与生物信息学预测基础上的miRNA靶基因鉴定研究进展

microRNA(rniRNA)是一类长度约22个核苷酸(nt)的非编码单链小RNA分子.近年来,大鼍的研究证明,miRNA参与了许多重要的生物学过程,其异常表达在肿瘤的发生发展中扮演着癌基因或抑癌基因的角色.关于与肿瘤相关miRNA的实验研究方案通常包括4个步骤:①通过基因芯片技术对癌组织与配对的正常组织中差异表达的miRNA进行筛查,确定候选miRNA;②通过生物信息学软件对所获差异表达的miRNA进行靶基因预测,为后续鉴定差异表达miRNA的靶基因提供线索;③通过RISC免疫共沉淀、稳定同位素标记蛋白质谱或miRNA-mRNA复合物分析等实验方法对miRNA的靶基因进行实验室鉴定;④分析差异表达的miRNA及其靶基因与病理、肿瘤复发转移情况以及生存期等临床指标之间的相关关系,确定mjRNA的肿瘤生物学意义.在本文中,结合我们实验室最近利用基因芯片技术研究食管癌中差异表达miRNA及其靶基因的实验结果,综述了目前miRNA及其靶基因鉴定方面的最新研究进展.     

应用毕赤酵母系统表达人Fascin蛋白

背景与目的:应用酵母表达系统表达人的重要肿瘤分子标志物fascin蛋白。材料与方法:利用分子克隆技术将fascin基因完整编码区克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPIC9中,获得重组质粒pPIC9-fascin;以限制性内切酶MssⅠ进行线性化并转化毕赤酵母GS115菌株,用PCR方法筛选出阳性整合克隆;对阳性克隆进行0.5甲醇诱导表达重组蛋白,银染及Western blot检测培养上清中fascin重组蛋白的表达情况。结果:毕赤酵母能够分泌表达约69kD的fascin重组蛋白,表达量为40μg/L。结论:毕赤酵母可以分泌表达fascin蛋白,但由于分泌表达量较低,尚达不到工程化要求。     

食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5''''-UTR和3''''-UTR的克隆与鉴定

背景与目的:NGAL(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员。以往我们曾研究发现NGAL基因在TPA诱导永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEC恶性转化的过程中显著过表达,但表达调控机制不清楚。本研究拟从SHEEC细胞中克隆NGAL基因的5'-UTR和3'-UTR(untranslatedregion)并进一步明确其结构特征。方法:采用RACE方法从SHEEC细胞中克隆NGAL基因的5'-UTR和3'-UTR;在测序基础上进行BLAST分析鉴定。结果:结合以往的实验结果,从SHEEC细胞中克隆了NGAL基因的69bp5'-UTR和147bp3'-UTR,而且序列分析未发现突变。结论:SHEEC细胞中的NGAL基因具备完整的5'-UTR和3'-UTR结构。     

食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5′端转录调控区的克隆及其顺式作用元件定位分析

目的 :从食管癌细胞SHEEC中克隆NGAL基因 5′端转录调控区并进行顺式作用元件定位分析。方法 :采用PCR法克隆NGAL基因 5′端转录调控区 ,并通过NCBI公共数据库BLAST序列分析鉴定突变。应用KEGG序列数据库对该调控区进行顺式作用元件定位分析。结果 :从SHEEC中获得了NGAL基因 5′端转录调控区 - 112 4～ +6 5区段的克隆 ,该区段序列有 3处点突变 ,在NGAL基因- 112 4～ +6 5区段共鉴定出 78个有效顺式作用元件位点。结论 :多种反式作用因子可能是永生化食管上皮细胞恶性转化中NGAL基因转录增强的重要调控因素     

医学生参加分子生物学科研项目的综合素质调查分析

近十余年来,中国的高等医学教育获得了很大的发展,但与此同时,医学生的科研创新能力较差等深层次问题也逐渐凸现出来。为了切实提高医学生的科研创新能力,更好地培养高素质高等医学人才,近年来,汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室一直致力于开展医学生参加的科研项目。为了准确把握医学生的整体状况,在实施项目研究之初,对他们的综合素质进行了一次系统问卷调查,结果发现英语水平和电脑水平较低是医学生综合素质中的主要负性因素,可能会对他们的科研创新能力的培养带来不良影响。