miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞系HepG2放疗敏感性

目的探究miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞放射敏感性的作用机制。方法用分次放疗放射递增法诱导建立放射抵抗型细胞株(RR-HepG2);RT-qPCR检测HepG2和RR-HepG2在不同放射剂量下miR-150-5p的表达水平;细胞克隆实验检测相同放射剂量下两种细胞的放疗敏感性;流式细胞计量术和Western blot检测过表达miR-150-5p对HepG2凋亡的影响;双荧光素酶报告基因法检测miR-150-5p与SIRT1的关联;细胞克隆实验和Western blot检测过表达SIRT1后,细胞的放疗敏感性和凋亡蛋白的变化。结果与亲代HepG2比较,相同放射剂量下,RRHepG2组miR-150-5p的表达量均显著降低(P<0. 05);放射处理后,与control、agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,敏感性高(P<0. 05),Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高;双荧光素酶报告基因法验证miR-150-5p靶向调控SIRT1。与agomiR-NC组比较,野生型(WT) agomiR-150-5p荧光素酶活性显著降低,SIRT1蛋白水平显著降低(P<0. 05);与anta-agomiR-NC比较,野生型(WT) anta-agomiR-150-5p荧光素酶活性显著升高,SIRT1蛋白水平显著升高(P<0. 05);放射处理后,与agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);与agomiR-150-5p+vector组比较,agomiR-150-5p+SIRT1组的细胞存活分数显著升高,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0. 05)。结论 miR-150-5p靶向SIRT1,下调其表达,提高肝癌细胞放射敏感性,可为临床肝癌放射治疗增敏提供靶点。     

分泌PD-1抗体的EGFR-CAR-T细胞可明显抑制胃癌的进展

目的：探索分泌PD-1 scFv的CAR-T细胞对胃癌的抗瘤功效。方法：选择EGFR作为CAR-T细胞的靶标,构建二代EGFR-CAR-T细胞（EGFR BB-z）和分泌PD-1 scFv的四代EGFR-CAR-T细胞（EGFR BB-z/E30）,通过体外激活以及靶细胞长期刺激检测其抗肿瘤活性,通过胃癌移植瘤小鼠模型检测其肿瘤抑制能力。结果：胃癌组织及细胞均高表达EGFR（均P<0.01）。通过慢病毒感染的方式成功获得EGFR BB-z和EGFR BB-z/E30细胞。体外实验表明,与EGFR BB-z相比,EGFR BB-z/E30具有更长效的增殖能力及更强的肿瘤杀伤活性（均P<0.01）。体内实验显示了EGFR BB-z/E30在胃癌细胞皮下移植瘤模型和胃癌人源性肿瘤异种移植瘤（patient-derived tumor xenograft,PDX）模型中具有明显的肿瘤抑制能力（均P<0.01）,并可显著增加肿瘤部位 T 细胞的浸润（P<0.01）,减少 EGFR BB-z/E30 细胞表面 PD-1 的表达（P<0.01）和高分泌 IFN-γ 的水平（P<0.05）。结论：分泌PD-1 scFv的EGFR-CAR-T细胞EGFR BB-z/E30可对胃癌进展产生显著的抑制作用,为胃癌治疗提供一种潜在新策略。     

STC2 基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞生物学特性的影响研究

目的:探讨斯钙素鄄2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法: RT鄄PCR 及Western blot 分别检测乳腺癌组织中STC2 基因的mRNA 及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA 转染人乳腺癌MCF-7 细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h 后,Western blot 检测各组细胞中 STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1 蛋白表达; CCK8 检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2 基因在乳腺癌中的mRNA 及蛋白表达均显著高于癌旁组 织(P<0.05);STC2 基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0郾05),与病理分期、肿瘤大小相关(P< 0.05);NC-siRNA 组STC2 的蛋白表达与Control 组差异无统计学意义(P>0.05),STC2鄄siRNA 组STC2 的蛋白表达显著低于 Control 组(P<0.05);STC2鄄siRNA 组细胞存活率、S 期和G2/ M 细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1 蛋白表达显著低于Control 组,细胞凋亡率、G0/ G1 期细胞及Cleaved caspase3 蛋白表达显著高于Control 组(P<0.05)。结论:STC2 基因在乳腺癌中高表 达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1 期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调 ki67、cyclin D1 和上调Cleaved caspase3 表达及下调Notch1 信号通路有关。     

外周血Septin9基因甲基化检测对肺癌诊断的意义及对肺癌细胞A549生物学特性的影响

目的:探讨肺癌患者外周血Septin9基因甲基化状态与临床病理特征的关系,及其对人肺癌A549细胞生物学行为的影响。方法:选取104例肺癌患者为研究对象,96例健康人员为对照,采用甲基化特异聚合酶链式反应(PCR)法检测两组外周血中Septin9基因甲基化情况,并计算Septin9基因甲基化阳性率,分析Septin9基因甲基化阳性率与肺癌临床病理特征的关系。采用5、10、20μmol·L^-1 5-aza-dC处理人肺癌细胞系A549,以正常培养的A549细胞作为对照组,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中Septin9 mRNA和蛋白表达,通过MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力。结果:与对照组相比,肺癌患者外周血中Septin9基因甲基化阳性率显著升高。Septin9基因甲基化阳性与肺癌患者的TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关,Septin9基因甲基化阳性与肺癌患者的性别和年龄无关。经5-aza-dC处理后,A549细胞中Septin9 mRNA和蛋白表达水...     

维生素D3对结肠癌增殖和凋亡的影响及机制研究

[目的]探讨维生素D3对结肠癌增殖和凋亡的影响及机制研究。[方法]通过对临床结肠癌患者样本收集,血液中维生素D含量检测、受体检测、PCR定量、蛋白质免疫印迹等分子生物学实验,研究维生素D3对结肠癌增殖和凋亡的影响和机制。[结果]ELISA结果显示结肠癌患者血液中的1,25-二羟维生素D3含量(11.54±3.15)ng/ml和2,5二羟维生素D3含量(10.67±2.31)ng/ml较健康对照组1,25-二羟维生素D3为(29.65±7.25)ng/ml,2,5二羟维生素D3为(15.34±6.98)ng/ml明显降低,且维生素D受体的mRNA水平(5.01±3.86)相对对照组(9.36±4.87)较低,免疫荧光技术结果表明维生素D3通过Wnt信号通路影响结肠癌,蛋白质免疫印迹和PCR结果显示维生素D3处理后的人结肠癌细胞SW480中Wnt信号通路相关蛋白,EMT相关蛋白和β-catenin表达量均下调。[结论]维生素D3能够有效减少结肠癌组织的增殖,从而降低结肠癌发病率和防止结肠癌复发。     

外周血单核细胞和中性粒细胞计数预测转移性非小细胞肺癌患者对免疫检查点抑制剂反应的临床价值

目的探讨外周血单核细胞和中性粒细胞计数预测转移性非小细胞肺癌(mNSCLC)患者对免疫检查点抑制剂(ICI)治疗反应的临床价值。方法回顾性研究2017年1月至2019年3月在海南省儋州市人民医院接受纳武利尤单抗或帕博利珠单抗治疗的34例成年mNSCLC患者资料,记录并分析患者的人口学特征、临床资料、开始治疗前2周内和ICI治疗后2周血液学检查结果与预后的相关性。结果对ICI治疗有反应患者的基线中位单核细胞计数和中性粒细胞计数均低于无反应患者[(0.52±0.09)×10⁹/L比(0.60±0.12)×10⁹/L,(4.27±0.87)×10⁹/L比(5.39±1.02)×10⁹/L],差异均有统计学意义(t值分别为-2.572、-2.727,均P<0.05)。对ICI治疗有反应患者的单核细胞计数与反应时间呈负相关(r=-0.507,P<0.05)。单核细胞计数>0.70×10⁹/L患者的中位反应时间短于单核细胞计数≤0.70×10⁹/L的患者(8周比12周),差异有统计学意义(χ²=4.162,P=0.041)。单核细胞计数与反应持续时间、无进展生存及总生存之间均无相关性(r值分别为-0.214、0.182、0.232,均P>0.05)。对ICI治疗有反应患者的中性粒细胞计数降低22%,高于无反应患者的2%,差异有统计学意义(P<0.05)。首次给药后中性粒细胞计数截断值为4.2×10⁹/L,中性粒细胞计数≤4.2×10⁹/L患者的反应率高于>4.2×10⁹/L患者[86.7%(13/15)比36.8%(7/19)],差异有统计学意义(χ²=6.657,P<0.05)。结论外周血单核细胞和中性粒细胞计数对mNSCLC患者ICI治疗反应具有一定预测价值。     

长链非编码RNA PVT1和miR-30d-5p在肝内胆管癌组织中的表达及其与预后相关性分析

目的:分析肝内胆管癌（ICC）组织中长链非编码RNA PVT1（lncRNA PVT1）和miR-30d-5p的表达,探讨其与ICC患者临床病理因素及预后的关系。方法:收集2012年3月至2015年9月间经手术切除的47例ICC组织和相应癌旁组织（≥5 cm）。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测组织中lncRNA PVT1、miR-30d-5p表达水平,分析二者表达与临床病理因素及3年总生存率（OS）的关系。结果:ICC组织中lncRNA PVT1表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.05）,miR-30d-5p表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.05）。lncRNA PVT1表达与ICC患者肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关（P＜0.05）,miR-30d-5p表达与ICC患者组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P＜0.05）。ICC组织中lncRNA PVT1表达与miR-30d-5p表达呈负相关（P＜0.05）。lncRNA PVT1低表达者3年OS明显高于高表达者（P＜0.05）,miR-30d-5p高表达者3年OS显著高于低表达者（P＜0.05）。组织分化程度、TNM分期、lncRNA PVT1表达、miR-30d-5p表达均是影响ICC患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。结论:ICC组织中lncRNA PVT1高表达、miR-30d-5p低表达,二者表达与ICC患者组织分化程度、TNM分期及预后有关。     

肺炎链球菌通过Wnt信号通路介导肺腺癌细胞A549损伤的机制研究

目的研究肺炎链球菌刺激对肺腺癌细胞A549损伤的影响及作用机制。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分为对照组和肺炎链球菌R6刺激组。R6刺激组将肺炎链球菌按照1×10~8个/ml的量加入A549细胞中进行刺激,对照组加入等体积的曲古抑素A(TSA)处理作为对照。分别处理8 h、16 h、24 h、32 h,MTT检测处理各时间点A549细胞存活情况;流式细胞仪检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测R6刺激24 h后炎症因子白介素6(IL-6)、IL-10含量变化;Western-blot检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡相关蛋白及Wnt通路蛋白表达。结果 R6刺激显著抑制A549细胞存活,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),R6刺激24 h对A549细胞存活抑制效果最明显。R6刺激24 h后,A549细胞凋亡率增高,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。R6刺激24 h后促炎因子IL-6含量显著增加,抗炎因子IL-10含量明显降低,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。Western-blot结果显示R6刺激后,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,抑凋亡因子Bcl-2表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),Wnt通路蛋白β-catenin、p-GSK-3β表达明显升高,p-β-catenin、GSK-3β表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。结论肺炎链球菌刺激会对肺腺癌细胞A549损伤造成损伤,这一过程与Wnt信号通路的激活有关。