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诊断学是关于疾病诊断基本理论、基本技能、基本方法的重要医学专业课程。标准化病人的引入,缓解了我国教学资源不足及医患关系紧张的矛盾,在学生基本技能及医患沟通能力培养方面显露优势。但标准化病人的应用在诊断学教学实践中存在诸多问题,对此进行分析,以寻求相关对策。 相似文献
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目的 构建含人的肿瘤侵袭和转移的特异性抗原CD44v6编码基因的真核表达的重组载体,进行核苷酸序列分析,并在肿瘤细胞中表达.方法 ①以pBud作为真核表达载体,选择CD44v6编码基因进行RT-PCR扩增,构建重组表达质粒,进行酶切鉴定和测序分析.②在Lipofectamine 2000的介导下,将构建成功的pBud-CD44v6重组表达质粒转染到肿瘤细胞中,通过免疫组织化学方法检测CD44v6的表达.结果 经酶切鉴定和测序分析表明,插入的目的 基因片段为CD44v6的编码基因,长为129 bp,与GenBank中登录的cDNA相比较,同源性高达100%,且方向正确;重组质粒pBud-CD44v6转染对数生长期胃癌细胞株SGC-7901,进行免疫组织化学检测结果显示,与空质粒转染组对比,重组质粒组肿瘤细胞的细胞质中可见大量CD44v6基因编码的表达,其蛋白呈棕黄色,而对照组呈阴性.结论 成功构建了pBud-CD44v6真核表达的重组载体,并在肿瘤细胞中表达. 相似文献
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目的 观察携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体是否能在人正常肝细胞株L02中表达,并探讨其对体外诱导肝细胞脂肪变的预防作用及其意义,为AdipoQ在非酒精性脂肪肝病的基因治疗中奠定基础.方法 将构建含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ转染L02细胞(L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,n=10),与pEGFP-N1空质粒转染L02细胞(L02/pEGFP-N1组,n=10)以及L02正常细胞株(L02组,n=10)为对照,分别加入浓度为20 μg/ml的油酸进行培养72h,用油红O染色观察细胞内脂滴,并检测细胞内甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和甘油的含量.采用SAS8.2软件进行统计分析,3组之间总体差异的检验采用单因素方差分析,3组之间两两比较采用SNK-q检验.结果 含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ能够在L02细胞株中表达,油红O染色显示72 h L02组和L02/pEGFP-N1组分别比L02/pEGFP-N1-AdipoQ组脂肪变性更为明显.L02组,L02/pEGFP-N1组和L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,TG含量分别为(89.23±18.45)μmol/L、(78.66±16.38)μmol/L和(26.58±7.65)μmol/L,FFA含量分别为(85.39±17.26)μmol/L、(75.63±12.25)μmol/L和(25.37±8.73)μmol/L,甘油含量分别为(62.29±13.59)μmol/L、(57.35±18.43)μmol/L和(15.37±7.53)μmol/L,F值分别为50.58、59.37、34.32,P值均<0.01.在L02/pEGFP-N1组中TG、FFA和甘油含量均明显高于L02/pEGFPN1-AdipoQ组,t值分别为7.81、8.50、6.75,P值均<0.01.在L02组中TG、FFA和甘油含量均显著高于L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,t值分别为9.39、10.15、7.54,P值均<0.01.TG、FFA和甘油含量在L02/pEGFP-N1组和L02组之间,差异无统计学意义.结论 携带人脂联素基因真核表达载体能够在L02细胞株中表达,而且具有预防肝脂肪变性的作用. 相似文献
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目的:构建携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体并在减毒沙门氏菌中表达,为AdipoQ对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的基因治疗提供依据.方法:从人脂肪组织中提取总RNA,通过实时荧光定量PCR(rRT-PCR)方法获得Adi-poQ基因并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEG-FP-N1-AdipoQ重组载体.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌SL7207中表达.结果:克隆的人AdipoQ基因744bp测序结果显示:1个碱基发生突变,654位:A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp.经SDS-PAGE,Western Blot检测融合蛋白Mr约为55×10^3(绿色荧光蛋白Mr约为27×10^3),能够被AdipoQ抗体识别.结论:成功构建携带AdipoQ基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株,AdipoQ基因能够在减毒沙门氏菌中表达并与绿色荧光蛋白融合.为进一步研究其在NAFLD中的作用机制奠定了基础. 相似文献
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目的 探讨超声造影剂联合超声介导mdr1、mrp基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染QGY耐药肝癌细胞对多药耐药(MDR)的逆转.方法 分别将mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照转染QGY/CDDP肝癌细胞,检测转染后细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因mRNA表达和相应耐药蛋白表达变化.结果 mdr1-ASODN转染后,细胞贴壁率和耐药基因mRNA表达变化大(P<0.05),细胞药物敏感性和耐药蛋白P-gp、MRP表达变化小(P>0.05).实验组(2组)作用更大(P<0.05).mrp ASODN转染后,细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因的mRNA表达和耐药蛋白P-gp、MRP表达均变化明显(P<0.05),实验组(2组)作用更大(P<0.05).结论 mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照能够低毒部分逆转肝癌细胞MDR,是潜在肿瘤基因治疗方法. 相似文献
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槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响 总被引:13,自引:0,他引:13
目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率,荧光显微镜了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显,呈浓度和时问依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为14.12μm(SGC-7901)和28.13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10~20μm/L的槲皮素处理,SGC-7901细胞周期阻滞于G0/G1期,BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡,是有效的抗癌药。 相似文献
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目的 探讨可溶性肿瘤坏死因子相关捌亡诱导配体(soluble tumor necrosis factor.related apoptosis inducing lig-and,sTRAIL)真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用. 方法 建立胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型,成瘤后于瘤内多点注射重组真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL,并设pBud-EGFP组和生理盐水组为对照,观察并记录肿瘤的生长情况.Western blot和RT-PCR检测sTRAIL mRNA和蛋白表达情况,HE染色观察肿瘤组织病理改变,TUNEL法及电镜技术观测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果注射pBud-EGFP-TRAIL组的sTRAIL mRNA和蛋白为阳性,其瘤休大小明显小于pBud-EGFP组和生理盐水组.差异有统计学意义(P<0.05).HE染色示pBud-EGFP-TRAIL组肿瘤细胞大量死亡,电镜下可见到典型凋亡细胞,TUNEL法显示其凋亡细胞明显增多. 结论 sTRAIL真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL瘤内注射对人胃癌裸鼠移植瘤有抑制作用. 相似文献
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目的 探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法 实时荧光定量PCR检测EDN3 mRNA在人结直肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,半定量PCR检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB) mRNA在结直肠癌细胞(CaC02、LoVo、HT-29)中的表达情况.将包装过载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-EDN3的病毒感染至结直肠癌细胞LoVo,MTS、克隆形成法、划痕法、Transwell检测EDN3对细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力的改变.Western blot检测LoVo中p-ERK1/2和t-ERK 1/2蛋白改变.结果 EDN3在人结直肠癌组织和细胞中表达降低.表达EDN3基因的重组载体成功感染至LoVo细胞.MTS和克隆实验结果显示,实验组和对照组细胞增殖和克隆形成差异无统计学意义(P>0.05),划痕实验和Transwell实验提示实验组细胞迁移和侵袭能力明显低于对照组(P<0.01).Western blot检测结果显示磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降(P<0.01).结论 EDN3在结直肠癌组织和细胞中表达降低,过表达EDN3能抑制结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与ERK1/2信号通路有关. 相似文献
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靶向COX-2的RNA干扰抑制胃癌细胞增殖及相关信号分子改变 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:本研究初步探讨RNA干扰技术应用于胃癌基因治疗的特异性及作用机制。方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2并导入胃癌SGC-7901细胞株,在体外诱导RNA干扰,采用RT-PCR和Western blot同时检测处理组和对照组COX-2基因表达,MTT检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期;并用Westernblot检测相关信号分子p53、PCNA及Ki67蛋白表达。结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2导入胃癌SGC-7901细胞株后,胃癌细胞生长明显被抑制;细胞周期相分布发生显著变化,G1/G0期细胞明显减少,S期细胞显著增加;与对照相比,COX-2 mRNA分别下调88.36%和86.24%,COX-2蛋白表达分别下调94.27%和91.59%。p53蛋白表达上调,PCNA及ki67蛋白表达均明显下调。对照组各指标均无明显变化。结论:siRNA明显抑制了COX-2的表达及胃癌SGC-7901细胞增殖,并引起细胞周期改变,可能与上调p53蛋白和下调PCNA及ki67蛋白表达有关。 相似文献