红景天苷通过miR-99a-5p/IGF-1R信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的:探讨红景天苷调节微小RNA-99a-5p（microRNA-99a-5p,miR-99a-5p）/胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人鼻咽上皮细胞（NP69）、鼻咽癌细胞系（CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2）中miR-99a-5p、IGF-1R信使RNA（mRNA）表达水平;将对数期HNE2细胞分为对照组（常规培养HNE2细胞）、红景天苷低浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入0.5 μg/mL的红景天苷）、红景天苷中浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入1 μg/mL的红景天苷）、红景天苷高浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷）、模拟物（mimics）-NC组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics阴性对照）、miR-99a-5p mimics组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics）、红景天苷高浓度+抑制剂（inhibitor）NC组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor阴性对照）、红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor）。qRT-PCR法检测各组HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平;细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验、蛋白免疫印迹法分别检测HNE2细胞增殖能力、凋亡率、侵袭能力、迁移能力、IGF-1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p与IGF-1R的靶向关系。结果:与NP69细胞相比,CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2细胞系中miR-99a-5p表达水平降低,IGF-1R mRNA表达水平升高（P＜0.05）,其中HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平与NP69细胞差异更明显（P＜0.05）;与对照组相比,红景天苷低、中、高浓度组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率依次升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率依次降低（P＜0.05）;与对照组、mimics-NC组相比,miR-99a-5p mimics组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率降低（P＜0.05）;与红景天苷高浓度组、红景天苷高浓度+inhibitor NC组相比,红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率降低（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率升高（P＜0.05）;miR-99a-5p与IGF-1R存在靶向关系。结论:红景天苷可能通过促进miR-99a-5p表达,靶向抑制IGF-1R表达,参与抑制HNE2细胞增殖、侵袭、迁移,并促进HNE2细胞凋亡。