bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立

目的:构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病(CML)样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法:bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampe细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线(900cGy)照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果:小鼠移植8～9 wk后,外周血白细胞达2×1010～3×1010/L(为对照鼠的5～8倍),外周血涂片幼稚细胞达到0.10～0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4～5wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8～9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3～5 Ino后相继死亡.结论:成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.     

ICU血培养标本送检及细菌分离情况变迁分析

目的了解ICU患者血培养标本送检方式、阳性率、污染率及病原菌分离情况,为规范ICU患者血培养标本送检及血流感染(BSI)治疗提供依据。方法对成都市第二人民医院ICU 2013-2017年血培养的阳性率、污染率、不同送检套数阳性率的差异、病原菌的分离情况进行分析,数据采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。结果 5年ICU血培养阳性率为6.2%～12.0%,污染率为2.2%～3.2%;不同送检套数的阳性率比较,2套阳性率明显高于1套,差异有统计学意义(P0.05)。5年中,污染菌中凝固酶阴性葡萄球菌分离率占首位,占分离率的43.0%～68.0%;病原菌分离以革兰阴性菌占优势,为55.0%～61.0%,大肠埃希菌为首位;革兰阳性菌分离比例在24.0%～37.0%;真菌分离率为4.7%;专性厌氧菌分离率为0.3%。结论增加采血套数可提高血培养的阳性率并帮助判断污染菌,结合该院血培养细菌药敏情况采用合理的抗菌药物,有助于降低BSI发病率和病死率。     

降钙素原与血培养联合检测以改善脓毒症诊断的敏感性及协助鉴别污染菌

目的 比较血培养单检与降钙素原（PCT）加血培养双检对脓毒症诊断的敏感性及协助鉴别污染菌.方法 收集644例急诊或重症监护室临床医师怀疑新发生严重感染患者同天的血培养及PCT样本,对未开PCT检测的病患同时检测PCT,以出院脓毒症确诊为金标比较血培养单检及PCT加血培养双检对脓毒症的诊断及血培养污染诊断的敏感性与特异性.结果 脓毒症病患中血培养单检的敏感性为34.1%,特异性为90.1%,假阳性率为9.9%,假阴性率为65.9%,阳性预测值为57.0%,阴性预测值为78.0%.二者双检的敏感性为98.4%,特异性为90.1%,假阳性率为10.2%,假阴性率为1.6%,阳性预测值为79.2%,阴性预测值为99.3%.结论 血培养单检对脓毒症的诊断存在着污染菌的干扰因素,PCT与血培养联合检测对脓毒症的诊断比血培养单检更具有诊断价值,从而及时有效的指导临床合理应用抗生素治疗,减少耐药株的产生,从而降低死亡率.     

HBV感染合并GDM孕妇糖脂代谢水平与母婴结局的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染合并妊娠期糖尿病(GDM)孕妇糖脂代谢水平与母婴结局的关系。方法回顾性分析2015年1月-2019年12月106例HBV感染合并GDM孕妇,分为A组(慢性乙型肝炎GDM孕妇)40例和B组(HBV或HbsAg携带GDM孕妇)66例。收集非HBV感染的GDM孕妇50例设为C组,健康孕妇35名设为D组。比较各组孕妇糖脂代谢指标以及母婴不良结局发生率。结果A组、B组、C组孕妇的空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清瘦素水平高于D组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清脂联素水平低于D组(P<0.05)。A组孕妇的新生儿不良结局、产妇不良结局发生率高于B组、C组、D组(P<0.05)。慢性乙型肝炎(OR=4.697)、HBV携带(OR=2.307)、GDM(OR=3.062)是母婴不良结局的独立危险因素(均P<0.05)。结论HBV感染合并GDM孕妇存在糖脂代谢紊乱,血清瘦素和脂联素明显变化,与母婴不良结局存在一定关联;HBV感染状态影响母婴结局,慢性乙型肝炎孕妇发生母婴不良结局的风险更高。     

肺炎链球菌临床分布情况及药敏分析

目的 了解肺炎链球菌(SP)临床标本分布情况及药敏结果,对SP感染在临床诊断、治疗及预防提供依据.方法 将2010-2015年分离出的非重复菌株416株SP,采用ATB Express细菌鉴定系统进行鉴定及药敏试验,结果 按CLSI2014年版标准进行判读.结果 6年中,SP在冬春2季呈分离高峰;呼吸道标本检出达90％以上;以幼儿和老年人为主;对青霉素、阿莫西林等仍然保持高度敏感性,但其敏感率与非敏感率比较差异有统计学意义(P＜0.05);而克林霉素、红霉素等呈现高水平不敏感,其敏感率与非敏感率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 虽然青霉素等β-内酰胺类抗菌药物仍可作为SP感染治疗的首选,但青霉素中介的SP(PISP)及耐青霉素的SP(PRSP)有逐年上升趋势;应根据药敏试验结果选择抗菌药物.     

酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响

目的 建立人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562细胞在伊马替尼(Imatinib mesylate)处理前、后的DNA损伤模型,探讨伊马替尼对K562细胞的DNA损伤修复功能的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法确定伊马替尼预处理K562细胞的浓度;用免疫印迹法(Western blot)检测伊马替尼处理后K562细胞BCR/ABL的磷酸化状态,以反映BCR-ABL酪氨酸激酶活性受抑制情况;用彗星实验检测不同浓度过氧化氢(H2O2)诱导的K562细胞、伊马替尼预处理K562细胞的DNA损伤模型;用彗星实验对各组细胞在DNA损伤后的修复进行动态观测.结果 MTT实验结果显示,伊马替尼预处理K562细胞的最佳终浓度为1 μmol/L,作用时间24 h;Western blot实验结果显示,该浓度的伊马替尼可有效抑制BCR/ABL融合蛋白第177位酪氨酸激酶磷酸化,密度比为0.100±0.018,与对照组(0.425±0.039)相比,降低了(77.11±5.59)%,差异有统计学意义(t=4.57,P＜0.05);彗星实验确定了各组细胞DNA损伤模型的建立条件,采用10 μmol/L终浓度的H2O2对K562细胞和伊马替尼预处理后K562细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间为4℃、10 min.修复结果显示,经伊马替尼预处理的K562细胞修复时间为120 min,与未处理组修复时间60 min相比,前者DNA损伤修复时间明显延长(F=97.79,P＜0.05).结论 本研究建立了伊马替尼处理前、后的白血病K562细胞的DNA损伤模型,BCR/ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能减弱K562细胞的DNA损伤后修复能力.     

儿科患者呼吸道感染常见病原菌及耐药性分析

目的：探讨儿科呼吸道感染疾病常见病原菌的分布情况及耐药性,为抗菌药物的临床使用提供参考。方法：对本院住院患儿的呼吸道标本进行培养,用法国梅里埃ATB-EXPRESS自动化细菌鉴定及药敏分析系统鉴定及做药敏,按美国临床和实验室标准协会CLSI 2012年标准,采用WHO-NET5.6软件进行统计分析。结果：517株细菌中前6位依次为流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌和卡他莫拉菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶株（ESBLs）检出率分别为53.5%和22.2%,流感嗜血杆菌产β-内酰胺酶阳性率为48.1%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为22.0%。结论：儿科患者临床分离病原菌对多种抗菌药物的耐药率逐年上升。为了减少细菌耐药率、延缓耐药菌株的出现,临床应重视病原学的检测及加强耐药监测。     

过表达Apg-2对H2O2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用

目的 观察过表达Apg-2对H2O2所致BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用。 方法 以H2O2作用于逆转录病毒空载体MIGR1感染细胞株BaF3-MIGR1和稳定表达BCR/ABL的BaF3-BCR/ABL细胞为氧化应激损伤模型,RT-PCR检测H2O2作用前后Apg-2基因表达水平;用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,观察细胞的损伤程度;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定过氧化物歧化酶(SOD)活性;Am-blue法检测细胞存活率。 结果 过表达Apg-2能明显改善H2O2导致的BaF3-BCR/ABL细胞损伤,与BaF3-MIGR1细胞处理组相比,过表达Apg-2可使BaF3-BCR/ABL细胞存活率升高,LDH释放率明显降低,降低MDA含量,提高SOD活性。 结论 过表达Apg-2对H2O2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤具有明显的保护作用。     

顺铂对bcr/abl转化BaF3-P210细胞DNA损伤与修复能力的影响

目的:研究顺铂(cisplatin,Cis)对白血病BaF3-MIGR1细胞和bcr/abl转化BaF3-P210细胞中DNA损伤修复能力的影响.方法:锥虫蓝染色法检测2种细胞经0.5、1、5、10、20和40 μg/mL Cis处理0、2、4、6、8、12、24和48 h时的存活率,免疫荧光法检测上述6种浓度Cis处理细胞8 h后诱导的γH2AX焦点数,Western印迹法检测DNA修复0、4、12和24 h后的γH2AX蛋白表达情况.结果:随着Cis处理时间和剂量增加,2种细胞的存活率降低,BaF3-P210转化细胞的存活率比BaF3-MIGR1细胞高(P<0.05);随着Cis剂量上升,2种细胞的γH2AX焦点数上升, BaF3-P210转化细胞的焦点数比BaF3-MIGR1细胞少(P<0.05);随着DNA修复时间延长,2种细胞的γH2AX蛋白表达均下调,BaF3-P210转化细胞的γH2AX蛋白表达量比BaF3-MIGR1细胞低.结论:Cis对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210转化细胞的损伤呈时间、剂量效应,2种细胞的γH2AX焦点数与损伤之间存在剂量效应,bcr/abl可增强BaF3-P210转化细胞的DNA修复能力.     

Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响

目的 探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响.方法 以H2O2诱导的pMIGR1 空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数.结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05).H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化.结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤.