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以邻苯二酚氧化酶基因－ｘｙｌＥ为靶基因，以新霉素抗性基因ｎｅｏ为选择基因构建的ｐＥＳｎｘ穿梭质粒转染人羊膜细胞ＦＬ，得到一株携带有完整的自主复制型ｐＥＳｎｘ质粒的Ｇ４１８抗性细胞株ＦＥＳｌ．７。经测定该细胞株平均每细胞含有质粒２６个拷贝，且在８个月的传代培养中保持稳定，ｐＥＳｎｘ质粒在ＦＥＳ１．７细胞内ｘｙｌＥ基因的自发突变率仅４．３×１０－５。因此由ＦＥＳ１．７细胞构成的系统可在人体细胞中进行诱变检测。该系统灵敏度高，可对低效诱变剂在人体中引起的基因突变进行检测，而且特别适合于研究人体细胞中基因突变的分子机制。利用此ＥＢＶ－ｘｙｌＥ穿梭质粒诱变分析系统我们已对ＥＭＳ进行了诱变分析，对于ＦＥｓ１．７细胞，１８９ｕＭＥＭＳ诱发的ｘｙｌＥ基因突变超过自发突变频率达２２倍。ＥＭＳ处理细胞２４小时能引起细胞内的质粒在ｘｙｌＥ基因座位上发生缺失突变。 相似文献
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以恶臭假单孢菌(Pseudonas putida)TOL质粒来的xylE基因为靶因可方便地进行突变分析,该基因编码邻苯二酚2,3-双加氧酶(Catechol 2,3-dioxygenase),或称邻苯二酚化酶(CatOz ase),通过喷洒邻苯二酚于氨苄青霉素抗性(ampr)菌落上,xylE-转化子就能检测出来,菌落变黄表示存在邻苯二酚氧化酶。我们在以前构建的EBV-xylE穿梭质粒pFD891(王晓利等,复旦学报理科版,1990第4期)的基础上构建了一对穿梭 相似文献
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本文使用自制的基因转移装置—电击仪对PUC9质粒在大肠杆菌MC1061菌株中的转化进行研究。通过控制电场强度、电击时间及菌的生长状态等几个方面,得到高效稳定的转化效率。最高转化率达10~8CFU/μg DNA,为细菌转化提供可靠的手段。 相似文献
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