BaP诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化

目的：通过分析苯并芘（BaP）诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化,探讨BaP致癌的作用机制。方法：以正常人支气管上皮细胞（16HBE）为研究对象,使用梯度浓度BaP（0、10、20和40 μmol/L）染毒处理,构建不同染毒周期（1周、9周和15周）的细胞株,使用5-甲基胞嘧啶（5-mC）细胞免疫荧光检测各组细胞基因组DNA整体甲基化水平的变化,并进一步利用Western blotting和实时荧光定量-PCR技术分析不同染毒周期细胞甲基化蛋白酶（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD2）表达的变化。结果：BaP染毒后,16HBE细胞的5-mC荧光强度表达下降,且随着染毒剂量的增加和染毒时间的延长,这种下降趋势更明显,其中40 μmol/L BaP染毒处理细胞15周时,肉眼已难以观察到可见荧光。与对照组比较,BaP染毒可下调细胞DNMT1蛋白及其mRNA的表达,并呈现明显的剂量和时间反应关系（P均 < 0.05）,但DNMT3a、DNMT3b、MBD2蛋白的表达变化不明显（P均 > 0.05）。结论：BaP可诱导16HBE细胞基因组DNA整体甲基化水平下调,DNMT1在其中可能发挥重要作用。     

苯并芘诱导肝脏的炎症损伤及EGFR的表达变化

目的：探讨苯并芘（BaP）长期暴露对大鼠肝脏的炎症损伤及表皮生长因子受体（EGFR）的表达变化。方法：选择6周龄雌性SPF级SD大鼠36只,将其随机分为染毒组和对照组,每组18只,染毒组胸腔注射10 mg/mL的玉米油-苯并芘0.2 mL,对照组注射0.2 mL玉米油,每2周注射1次,共4次,连续观察1年,期间记录大鼠的生存状况和体质量变化,实验结束时收集大鼠肝脏组织,利用HE染色进行病理分析,同时采用免疫组化、免疫荧光和Western blot检测肝脏组织中EGFR蛋白的表达变化。结果：与对照组比较,染毒组实验期间大鼠体质量和生长未见明显异常;病理分析发现BaP作用后的大鼠肝脏出现了明显的碎片状坏死和炎性浸润;免疫组化、免疫荧光结果均显示染毒组大鼠肝脏内EGFR表达增强;Western blot检测发现,染毒组EGFR蛋白表达水平（0.915±0.253）较对照组（0.452±0.095）明显升高（P < 0.05）。结论：BaP诱导肝脏炎症的同时可激活EGFR高表达,推测BaP诱发的炎症与EGFR的表达密切相关。