ROCK2调控骨肉瘤细胞的侵袭及迁移

目的 探讨骨肉瘤组织中ROCK2的表达对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学染色法检测骨肉瘤组织中ROCK2的表达;沉默骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,采用划痕愈合及Transwell实验分析骨肉瘤细胞的侵袭及迁移能力,并通过尾静脉转移实验检测降低ROCK2表达对体内转移的影响。检测骨肉瘤细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达,并在下调ROCK2的骨肉瘤细胞中加入EMT诱导剂TGF-β,检测其对细胞侵袭及迁移的影响。结果 ROCK2在骨肉瘤组织中的表达显著高于其相应的癌旁组织（P<0.05）,下调骨肉瘤细胞中ROCK2的表达后,其体内外侵袭及迁移能力明显被抑制（P<0.05）;EMT相关蛋白E-cadherin表达下降,而N-cadherin及Vimentin蛋白明显增加;诱导骨肉瘤细胞中EMT发生后能够减弱下调ROCK2对骨肉瘤细胞侵袭及迁移的抑制作用。结论 ROCK2在骨肉瘤组织中表达升高,通过诱导EMT的发生进而促进骨肉瘤细胞的侵袭及迁移。ROCK2可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。     

过表达葡萄糖调节蛋白78人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231的构建

目的 构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78, GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法 采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒,采用PCR法扩增质粒,后使用EcoRⅠ、NotⅠ限制性内切酶切割质粒,对酶切产物进行测序鉴定,成功构建pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。取对数生长期293FT细胞系（克隆分离株）,在培养皿中加入pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro混合液,培养48 h收集含GRP78慢病毒颗粒的上清液,保存备用。另取对数生长期人乳腺癌细胞系HS578T及MDA-MB-231,置于含GRP78慢病毒颗粒上清液的培养基中培养,培养48 h时在培养基中加入1∶500稀释嘌呤霉素,筛选GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系。加入嘌呤霉素培养48 h采用Western Blotting法检测HS578T、MDA-MB-...