β肾上腺素受体在舌癌CAL-27细胞系的表达及β受体阻滞剂对其增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 研究舌癌CAL-27细胞系中β-AR的表达及β受体阻滞剂对其增殖、迁移、侵袭的影响。方法: 采用Pan CK抗体对培养的正常口腔上皮细胞进行鉴定;免疫组织化学法及qRT-PCR法检测β-AR在舌癌CAL-27细胞的表达;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell法分别检测普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果: β1-AR、β2-AR在CAL-27细胞的表达均显著高于正常口腔上皮细胞（P<0.05）;β2-AR在CAL-27细胞的mRNA水平表达低于正常口腔上皮细胞而β1-AR表达高于正常口腔上皮细胞;两种药物对CAL-27细胞增殖均有抑制作用,药物浓度>50 μmol/L时,普萘洛尔抑制增殖的作用更强（P<0.05）;2种药物浓度>2.5 μmol/L,对CAL-27细胞迁移均有抑制作用,普萘洛尔的抑制作用更强;药物浓度>1.0 μmol/L,2种药物对CAL-27细胞侵袭均有抑制作用（P<0.05）,普萘洛尔对CAL-27细胞迁移抑制作用更强。结论: 在舌癌CAL-27细胞中, β1-AR在mRNA水平的表达高于正常口腔上皮细胞而β2-AR的表达低于正常口腔上皮细胞;低浓度普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞的增殖无明显抑制作用,但能抑制CAL-27的迁移和侵袭。     

原代口腔鳞癌细胞的分离培养及CD133 CD44的表达

目的探讨从人新鲜口腔鳞癌组织中培养原代鳞癌细胞的方法以及干细胞表面标志物CD133、CD44表达量的检测情况。方法选取该院2016~2017年行口腔鳞状细胞癌切除术的新鲜肿瘤标本6例,应用机械法获得原代口腔鳞癌细胞并用酶消化法传代。应用细胞形态学及角蛋白免疫组化方法对原代鳞癌细胞进行鉴定。流式细胞仪技术检测鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD133、CD44的表达情况。结果(1)成功培养出纯化的口腔鳞癌细胞,并能成功传代,至目前为止已传至27代。(2)培养出的OSCCs呈多边形铺路石状,角蛋白染色其胞浆中可见阳性棕色染色。(3)流式细胞检测鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD133的平均表达率为0.41%、CD44的平均表达率为33.76%。结论从人新鲜口腔鳞癌标本中利用机械法可成功获得大量原代口腔鳞癌细胞并能顺利传代,口腔鳞癌细胞中干细胞表面标志物CD44表达偏高,CD133的表达量明显偏低。     

血清生化因素与口腔颌面部游离组织瓣血管危象的相关分析

目的：探讨血清生化因素在游离组织瓣修复口腔颌面部缺损中对皮瓣成活的影响。方法：回顾分析广西医科大学附属口腔医院2002年1月—2014年4月游离组织瓣修复口腔颌面部缺损的患者799例,其中发生皮瓣血管危象64例,抢救成功43例,失败21例。从735例未发生皮瓣危象患者中随机分层抽取66例患者作为对照组。采集2组患者术前白蛋白、球蛋白、总蛋白、前白蛋白、纤维蛋白原,凝血酶原时间（PT）等生化指标。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果：统计学分析显示,行游离移植皮瓣后血管危象组白蛋白显著低于对照组,而血管危象组纤维蛋白原显著高于对照组（P<0.05）。Logistic 回归单因素分析结果显示,纤维蛋白原是皮瓣发生血管危象的危险因素（P<0.05）。结论：术前纤维蛋白原升高可能与口腔颌面部缺损游离皮瓣移植后发生皮瓣危象有关。     

β1、β2肾上腺素能受体在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨β1肾上腺素能受体（β1 adrenergic receptors，β1-AR）和β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic receptors，β2-AR）在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法 收集2017年7月至2018年7月在广西医科大学附属口腔医院口腔颌面外科手术切除的口腔鳞癌组织及相应癌旁组织60例，并收集同期于本院就诊的15例非口腔鳞癌患者的口腔正常黏膜上皮组织。采用RT-qPCR及Western blot法检测β1-AR和β2-AR mRNA及蛋白在组织中的表达，采用Cox回归分析其与临床病理特征及预后的关系。结果 β1-AR、β2-AR蛋白及β2-AR mRNA在口腔鳞状细胞癌组织中的相对表达量均高于癌旁组织（P＜0.01）及正常口腔上皮组织（P＜0.05）。β1-AR、β2-AR mRNA和蛋白表达水平均与临床分期有关，其中β2-AR表达水平还与淋巴结转移及术后复发有关（均P<0.05）。β2-AR高表达组患者1 年、3 年总生存率及无进展生存率低于β2-AR低表达组（χ2=3.945，P=0.047；χ2=9.286，P=0.002），β1-AR表达水平与患者总生存期、无进展生存期无关。校正潜在的混杂因素后，多因素Cox回归显示β2-AR蛋白低表达是影响总生存期的保护因素（HR=0.149，95%CI：0.028~0.785，P=0.025）。结论 β1-AR、β2-AR在口腔鳞状细胞癌组织中高表达，β2-AR高表达患者预后较差，可能是口腔鳞状细胞癌潜在的预后评估指标。     

免疫磁珠分选的口腔鳞状细胞癌干细胞诱导分化及成瘤活性研究

目的 探讨口腔鳞状细胞癌干细胞的诱导分化及成瘤活性。方法 采用免疫磁珠分选法从6例原代培养的口腔鳞状细胞癌细胞中分选出CD133⁺、CD44⁺细胞，以流式细胞术检测其纯度及细胞周期，并绘制CD133⁺细胞生长曲线。将分选出的细胞经诱导向成骨肪细胞及成脂肪细胞分化，将原代鳞癌细胞、分选所得的CD44⁺细胞及CD133⁺细胞进行体内成瘤实验。 结果 经免疫磁珠分选法成功获得CD44⁺细胞、CD133⁺细胞，其纯度经检测均在94%以上，且主要处于G0/G1期。CD133⁺细胞在接种后第2天进入对数期，细胞倍增时间为3.22 d。经诱导后CD44⁺、CD133⁺细胞成功分化为成骨细胞及成脂肪细胞。皮下注射后第3天可触及新生肿物，在3种细胞成瘤实验中CD133⁺细胞组瘤体体积最大，HE染色显示符合低分化口腔鳞状细胞癌病理表现。结论 免疫磁珠分选法可高效获得高纯度的口腔鳞状细胞癌干细胞。CD44⁺、CD133⁺细胞均具有较强的多向分化能力，CD133⁺细胞成瘤性较强。