环磷酰胺联合卡介苗对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞及效应细胞功能的影响

目的探讨环磷酰胺(CTX)联合卡介苗(BCG)治疗对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞和效应细胞功能的影响及CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤的相关性。方法将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型。采用CTX联合BCG治疗,观察各组动物的肿瘤体积、脾脏CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达水平、脾脏T淋巴细胞增殖和杀伤功能。结果CTX联合BCG治疗组肿瘤生长较肿瘤组缓慢;联合治疗组小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞数量明显低于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能明显高于肿瘤组(P<0.05);联合治疗组小鼠脾脏CTLs细胞的杀伤活性略高于肿瘤组(P>0.05)。结论CTX联合BCG治疗可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达水平,并增强机体抗肿瘤免疫应答,使肿瘤生长延缓。     

Toll样受体在S180肿瘤细胞上的表达及意义

目的通过比较S180肿瘤细胞体内、体外TLRs表达的变化,探讨TLRs在肿瘤发生、发展中的作用和意义。方法①将传代培养的S180腹水癌细胞接种于ICR小鼠腹腔左侧,建立S180腹水癌模型;②采用密度梯度离心法分离纯净肿瘤细胞;③采用半定量RT-PCR方法检测S180腹水癌体外传代培养细胞与荷瘤鼠体内瘤细胞TLR1-9 mRNA表达水平。结果TLR1、2、4、6在S180腹水癌体外传代培养细胞中表达水平高于荷瘤鼠体内瘤细胞;TLR7体外传代培养细胞中表达水平低于荷瘤鼠体内瘤细胞;TLR5、9体外传代培养细胞中有表达,荷瘤鼠体内瘤细胞无表达;TLR3、8体外传代培养细胞与荷瘤鼠体内瘤细胞均无表达。结论S180肿瘤细胞可表达TLRs,并且不同的TLRs在体内、体外的表达有所差异,提示TLRs在肿瘤的免疫逃逸中发挥一定的作用。     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

S180骨肉瘤细胞TLRs表达及其与肿瘤耐受的相关性

目的探讨TLRs在诱导S180骨内瘤细胞免疫耐受中的作用,为肿瘤临床的免疫治疗提供新的思路。方法建立S180腹水癌早晚期模型,采用RT-PCR方法检测体外S180骨肉瘤细胞和荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLR1-9 mRNA的表达水平,以及LPS体外刺激S180骨肉瘤细胞前后TGF-β和IL-10 mRNA表达变化,ELISA方法检测LPS体外刺激S180骨肉瘤细胞前后肿瘤上清液中TGF-β蛋白分泌的含量。结果体外S180骨肉瘤细胞表达TLR1-7和TLR9,TLR8不表达。荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLRs的表达不同,TLR4、9表达早期高于晚期,其中TLR4的高表达有统计学意义（P<0.05);TLR1、2、3、5、6和7表达晚期高于早期,但差异无统计学意义(P>0.05)。10μg/ml 的LPS在不同时间点体外刺激S180骨肉瘤细胞后IL-10 mRNA表达水平均上调,且有时间依赖关系,TGF-β在mRNA和蛋白水平也均有增加。结论体外S180骨肉瘤细胞表达多种TLRs,荷瘤鼠体内早晚期S180骨肉瘤细胞TLRs表达的不同在肿瘤发展的不同时期可能发挥不同的作用,S180骨肉瘤细胞TLR4信号通路活化后可能通过促进TGF-β和IL-10的分泌从而参与肿瘤的免疫耐受。