肺癌血浆VEGF、血循环癌细胞及树突状细胞相互关系的研究

目的　分析非小细胞肺癌 (NSCLC)患者VEGF血浆含量与癌细胞血道转移及树突状细胞 (DC)成熟的关系。方法　外周血获自正常人、肺部良性疾患以及NSCLC患者。血循环中的癌细胞和DC按已建立的流式细胞仪定量分析技术进行检测。血浆VEGF含量采用ELISA方法测定。结果　 12例正常人及 13例肺部良性疾患的血浆VEGF平均含量分别为 15 .7和 13.2 pg /ml,而 12 3例NSCLC患者的血浆VEGF平均含量为 140 .8pg /ml,显著高于正常人及肺部良性疾患者 (P <0 .0 0 1)。正常人及肺部良性疾患者外周血中癌细胞检测均为阴性 ,而 6 9例NSCLC患者血样中 32例阳性 ,阳性率为 46 .4% ,阳性患者的癌细胞平均含量为 0 .471× 10 6/L。正常人及肺部良性疾患者外周血中DC含量分别为 2 9.0和 2 2 .0× 10 6/L ,而 5 4例NSCLC患者的DC含量为 15 .9× 10 6/L ,显著低于正常人及肺部良性疾患者 (P <0 .0 5 )。若以VEGF≤ 5 6pg/m1作为正常值 ,则VEGF增高的NSCLC患者外周血中癌细胞阳性率及其含量明显增高而DC含量显著降低 ,其中以III、IV期患者最为突出。结论　NSCLC患者血浆VEGF增高具有促使癌细胞血道播散和抑制DC成熟的效应。     

ERCC1表达与Ⅰ-ⅢA NSCLC患者术后生存及顺铂耐药的相关性

目的分析Ⅰ~ⅢA期非小细胞肺癌(NSCLC)的切除修复交叉互补组1(ERCC1)表达水平与患者术后生存期的关系,探讨ERCC1表达与患者预后及顺铂耐药的相关性。方法收集1992年2月~1994年1月及2002~2005年经根治性手术并获长期随访的152例Ⅰ-ⅢA期NSCLC患者的临床资料。Ⅰ期NSCLC患者术后随机分成不化疗组和化疗组;Ⅱ、ⅢA期术后均采用以顺铂为主的联合化疗方案。免疫组化法检测所有肿瘤组织标本的ERCC1表达。Kaplan-M eier法计算生存率,Log-rank检验比较差异性,并行Cox模型多因素分析。结果Ⅰ期NSCLC患者ERCC1高表达者,不论化疗与否其预后都明显好于ERCC1低表达者。其中ERCC1高表达组1、3、5年生存率分别为100.00%、91.30%、86.74%,低表达组则为96.43%、60.71%、57.14%(P=0.0058)。不同于Ⅰ期NSCLC,Ⅱ~ⅢA期NSCLC术后化疗患者ERCC1低表达则有较好预后。其中Ⅱ期ERCC1低表达者中位生存期(MST)为60.0 月,而高表达者仅为25.5月(P=0.0442);ⅢA期ERCC1低表达组MST为41个月,高表达组仅为24个月(P=0.0203)。结论ERCC1表达对Ⅰ~ⅢA NSCLC术后患者生存的影响存在双相效应。在Ⅰ期NSCLC中,ERCC1高表达是预后良好的独立指标;而对Ⅱ~ⅢA期NSCLC术后化疗患者,ERCC1高表达更多体现的是对铂类耐药;故采用铂类为基础的辅助化疗可能将无助提高术后长期生存。     

人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究

目的 应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法 用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离，两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果 鉴定出l6个差异表达蛋白，包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27，应用western blot分析在蛋白水平上验证了2DE结果，RT-PCR检测出两组问mRNA水平也存在差异，但不显著，免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论 HCC转移与多种蛋白表达相关，其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用，可能为潜在的判断HCC转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。     

人骨髓间充质干细胞的体外培养及诱导分化

目的 建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC)。方法 利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠体内分化为软骨样细胞及成骨样组织,采用流式细胞仪检测细胞表面CD31、CD34、CD45、CD9、CD90、CD105和CD106。以2.5×10~7细胞接种于裸鼠皮下进行致瘤实验,用DY-NAL REU-SSO反向杂交法检测HLA。结果 细胞已连续培养超过30代仍能稳定生长,细胞表面特性为CD105、CD106阳性,而CD31、CD34、CD45、CD9、CD90为阴性。在体外能诱导成脂肪细胞、成骨细胞。无致瘤性,在裸鼠体内能形成软骨细胞及骨样组织。结论 培养了一株能在体外长期培养及具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞。     

尿型纤溶酶原活化素受体在胃癌活检标本中的表达和意义

尿型纤溶酶活化素（Ｕ－ＰＡ）是一种丝氨酸蛋白酶，Ｕ－ＰＡ在体内作用依赖于细胞膜相应受体（Ｕ－ＰＡ－Ｒ）的表达。我们对在内镜下３８例进展期胃癌患者的活检标本检测了Ｕ－ＰＡ－Ｒ和Ｐ５３基因蛋白。其中Ｕ－ＰＡ－Ｒ的阳性率为３４．２％，Ｕ－ＰＡ－Ｒ阳性的胃癌其Ｐ５３基因蛋白均呈阳性表达，另１０例非癌胃粘膜标本作对照，均为阴性。在进展期胃癌中Ｕ－ＰＡ－Ｒ阳性表达胃癌在Ｂｏｒｒｍａｎｎ３，４型者高于Ｂｏｒｒｍａｎｎ１，２型（Ｐ＜０．０５）而与活检标本的病理组织学分型无关。上述结果提示，应用胃镜诊断的进展期胃癌活检标本检测ＵＰＡ－Ｒ可作为胃癌恶性程度及估计预后的一项指标。     

复方丹参滴丸对冠心病患者循环内皮细胞的内皮素基因表 …

目的：探讨复方丹参滴丸（ＤＳＰ）对外周血徨以细胞ＥＴ－１基因表达的影响。方法;将７０例稳定型心绞痛患者随机分为治疗组（用复方丹参滴丸治疗）及对照组（用消心痛心治疗）,采用逆转录一合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法于治疗前后测定外周血循环内皮细胞ＥＴ－１基因表达,并与３０名健康人作治疗前比较。结果：７０例心绞痛患者６９例检出５４６ｂｐ阳性条带,健康者无１例阳性。经ＤＳＰ治疗后的２９例中有６例未检到阳性条     

女性肺癌的血管生成和血管内皮生长因子的表达研究

目的 研究女性非小细胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）中微血管密度（ＰＭＶＤ）和血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达,并分析其与病理分期,组织类型间的关系。方法 应用免疫组织化学技术,检测了４０例女性ＮＳＣＬＣ外科手术标本中ＭＶＤ和ＶＥＧＦ表达。其中鳞癌７例,混合型鳞腺癌６例,外科病理分期为Ｉ期１３例,Ⅱ－Ⅲ期２７例。结果 （１）３７例女性ＮＳＣＬＣ中ＶＥＧＦ阳性率平均为７８．４％,其中１期病例的阳性率为５８．     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其特性研究

目的 建立耐紫杉醇的人肺腺癌A549(A549/Taxol)细胞株,并初步研究其生物学特性.方法 应用抗肿瘤药紫杉醇以体外浓度递增和短时作用法筛选A549细胞株.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的耐药指数及对多种抗癌药物的敏感性;免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P170)、β-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况.结果 A549/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50 )是亲代A549细胞的512.8倍,群体倍增时间是亲代细胞的1.28倍,对紫杉醇、丝裂霉素、长春新碱、诺维本的耐药指数依次为512.8、66.48、4.88和 2.06;而对顺铂、健择无交叉耐药.A549/Taxol细胞高表达P170,β-tubulin表达水平高于其亲代细胞系.结论 成功建立了一株耐紫杉醇的A549/Taxol,并呈多药耐药特性.     

应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳（DIGE）和基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

自体外周血内皮祖细胞移植治疗大鼠肝硬化的研究

自体干细胞移植用于治疗缺血和需要组织修复及重建的疾病已受到人们的重视。由于肝炎时肝细胞损伤病因的持续存在，肝硬化一直持续发展，难以控制。本研究探讨自体外周血分离的内皮祖细胞对大鼠肝硬化的治疗作用。[第一段]