γ1neo-hgp100基因的体外转染表达及体内免疫保护效应

肿瘤转移是一个复杂的、多步骤的、肿瘤细胞和宿主细胞相互作用的过程，是恶性肿瘤的重要生物学行为，往往是导致病人死亡的直接原因。随着分子生物学的发展，对肿瘤转移抑制的研究已进入分子水平，nm23基因即是近年来发现并被证实与多种肿瘤的转移有关的较新的肿瘤抑制基因，该基因可能通过影响细胞内微管的聚合／解聚和G蛋白介导的信号传导，而参与肿瘤的发生和发展。     

基于基因免疫制备抗人绒毛膜促性腺激素β亚基单克隆抗体及其特性研究

用真核表达人绒毛膜促性腺激素β亚基((human chorionic gonadotrophinβ,hCGβ)的重组质TR421-hCGβ免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,ELISA法筛选阳性细胞株,经过多次的克隆化培养,最终获得10株持续、稳定分泌抗hCGβ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。随机抽取6H1杂交瘤细胞进行抗体的制备、纯化及免疫学特性的分析。间接ELISA法证明6H1单抗属于IgG2a亚类。Western blot证明6H1单克隆抗体可以特异性结合hCGβ,间接免疫荧光和流式细胞仪等结果表明,6H1单克隆抗体能够不同程度的结合不同来源的肿瘤细胞膜上表达的hCGβ分子,为进一步研究其生物学功能奠定了物质基础。     

mB7AP-exCD40L融合蛋白的分子设计及其在Pichia Pastoris中的表达和生物活性

目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。Westernblot鉴定融合蛋白的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)研究mB7AP-exCD40L对淋巴细胞增殖的影响。结果构建的重组Pichiapastoris实现了mB7AP-exCD40L的分泌表达,表达蛋白质的相对分子质量约2.6×103,对MLR具有抑制作用。结论分子模拟设计的mB7AP-exCD40L在Pichiapastoris表达体系成功表达,为进一步研究mB7AP-exCD40L在抗移植排斥反应中的作用奠定了基础。     

集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白（agrin）是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达，并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系；用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响；应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达，且经过实时定量PCR分析发现，集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关；当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制；经共聚焦显微镜观察发现，集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在，且和CD3分子共定位，抗集聚蛋白抗体町以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞，呵能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。     

超抗原SEA对CD4~+T细胞TCR V_β链的取用格局

用超抗原葡萄球菌肠毒素A (SEA )在体内或体外刺激C57BL/ 6小鼠 2种不同的TCRVβ链T细胞亚群 (Vβ3+ CD4+ 、Vβ1 1 + CD4+ T细胞 ) ,观察二者对超抗原的免疫应答。结果显示 :体内初次刺激后 ,2种T细胞亚群在刺激后第 2天都发生增殖 ,随后均逐渐下降至对照水平。但第 2次用同样剂量刺激后 ,Vβ3+ CD4+ T细胞群对SEA的再次刺激表现出增殖 ,而Vβ1 1 + CD4+ T细胞群对SEA再次刺激则表现出免疫无能。体外初次、再次刺激也分别获得与体内实验相同的结果。表明超抗原SEA可选择性地取用Vβ3+ CD4+ T细胞群并对其发生增殖 ,即超抗原SEA对CD4+ T细胞TCRVβ链的取用格局各有不同。     

抗核抗体启动原新观点的学术意义

新近 ,我们根据本室近十年的研究结果 ,提出了活化淋巴细胞核抗原量和性质的改变是诱导抗核抗体生成的启动原的新观点 ,其主要依据是 :①ＳＬＥ患者外周血Ｂ细胞、Ｔ细胞和单核细胞已被活化[1,2 ] ;②空肠弯曲菌 (ＣＪ Ｓ131)活化的Ｔ细胞接种 (ＴＣＶ)不仅不能预防和治疗由ＣＪ Ｓ131所引起的ＳＬＥ样反应 ,反而可引起抗核抗体 (ＡＮＡ)生成[3 ] ;③不同原因活化的Ｔ细胞、Ｂ细胞和ＬＡＫ细胞均能诱导ＡＮＡ生成[4] ;④活化淋巴细胞核、染色质以及ｄｓＤＮＡ和组蛋白均具有免疫原性[5 7] ;⑤活化淋巴细胞的核抗原如ＳｍＢ Ｂ’表达明显增高…     

实时定量RT—PCR检测临床肝组织标本中CXCL16及其受体的表达

[目的]建立实时定量RT—PCR方法并检测不同病理状态的肝脏组织中CXCL16趋化因子及其受体CXCR6的表达变化。[方法]建立外参照标准和灵敏的荧光实时定量RT—PCR方法，检测人正常肝组织、癌旁肝组织及癌组织标本中的趋化因子CXCL16及其受体的表达变化，进一步测定和比较其它相关的趋化因子表达谱的表达情况。[结果]获得了灵敏特异的实时定量RT—PCR方法，CXCL16及其受体在癌旁肝损伤组织中显著上调表达，显著高于趋化因子表达谱中其它趋化因子的表达变化，提示它在淋巴细胞尤其是T细胞介导的肝脏损伤过程中可能发挥重要作用。[结论]简便可靠的实时定量RT—PCR适用于检测病理组织中特异基因的表达变化，趋化因子表达谱改变尤其是CXCL16及其爱体CXCR6的显著变化可能与肝脏疾病的病理发生发展密切相关。     

调节性B细胞与自身免疫性疾病

以往认为，B淋巴细胞在自身免疫病中作为致病性淋巴细胞发挥作用。近年却发现，在自身免疫病小鼠模型中，采用B细胞清除疗法会加重疾病进程，提示B细胞具有免疫调节功能。调节性B细胞（Breg）是新近发现的一群新的B细胞亚群，它存在于B细胞多个亚型中。Breg通过刺激其表面分子，诱导释放调节性细胞因子如IL-10发挥调节作用。在不同自身免疫性疾病中，各种免疫细胞都可以成为Breg作用的靶细胞，表明Breg在自身免疫病复杂网络中的强大调节作用。     

Legumain在荷瘤与正常小鼠脾细胞中的差异性表达

背景与目的:已知新发现的半胱氨酸蛋白酶legumain可能参与肿瘤的发生发展.本研究检测了legumain在荷瘤组织及荷瘤与正常小鼠免疫细胞如脾脏T、B和巨噬细胞中的差异表达,为研究legumain在抗肿瘤免疫中的作用提供基础数据.方法:取正常和4T1荷瘤的雌性BALB/c小鼠的肿瘤组织或脾细胞,分离巨噬细胞和T、B淋巴细胞,检测legumain的基因表达水平.结果:在荷瘤小鼠的肿瘤组织和淋巴器官均检测到高表达的legumain,而且随着肿瘤进展,其表达水平相应提高;legumain除高表达于巨噬细胞外,脾脏中的淋巴细胞,特别是T淋巴细胞,与正常小鼠相比其legumain的表达水平显著升高.结论:荷瘤小鼠的肿瘤组织及其脾脏巨噬细胞和T细胞中高表达legumain,并且与肿瘤的发生发展呈正相关.     

4T1荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的表型及吞噬功能的研究

目的:研究小鼠乳腺癌实验动物模型中,荷瘤晚期肿瘤相关巨噬细胞的表型和功能,并探讨其与M2型巨噬细胞的关系.方法:从4T1荷瘤4周的雌性BALB/c小鼠中获取肿瘤相关巨噬细胞,用RT-PCR方法检测其巨噬细胞相关分子CCL3、CCL22、iNOS和Arg Ⅰ的表达水平,用FACS检测巨噬细胞中CDl6/32+和CD206+细胞所占比例,并通过酵母菌吞噬试验评估其功能.结果:肿瘤相关巨噬细胞与荷瘤小鼠的脾脏巨噬细胞相比,表达较高水平的CCL22和CD206,并且对酵母菌的吞噬能力显著下降.结论:4T1荷瘤4周小鼠肿瘤相关巨噬细胞在表型和功能上倾向于替代性活化的巨噬细胞.