酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞作用的机制探讨

目的:探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)的小分子酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞的作用机制.方法:以乳腺癌细胞MCF-7(EGFR-/+)和MDA-MB-468(EGFR+++)为研究对象,采用MTT及克隆形成实验检测AG1478对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-468细胞增殖和生长效应的影响;Western 印迹法测定EGFR、Akt和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的表达及活化水平;进一步应用FCM检测AG1478对MDA-MB-468细胞早期凋亡的影响.结果:AG1478 可抑制MDA-MB-468细胞的增殖和生长(P＜0.05),对MCF-7细胞增殖则无明显的抑制效应(P＞0.05);同时,MDA-MB-468细胞经AG1478处理后,细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化MAPK(p-MAPK)的表达水平明显降低(P＜0.05);FCM检测结果表明,AG1478可增加MDA-MB-468细胞的早期凋亡水平(P＜0.05).结论:AG1478可下调PI3K/Akt及Ras/Raf/MAPK信号通路,从而抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及生长,并促进细胞凋亡;但其对MCF-7细胞无明显作用.     

RAB25沉默抑制结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

目的 ：探讨沉默RAS相关结合蛋白25(ras-associated binding protein 25, RAB25)在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞铁死亡中的作用。方法：利用GEPIA (Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析RAB25的表达水平及与铁死亡关键基因表达之间的关联。在CRC细胞系HCT116上构建慢病毒介导的RAB25沉默细胞株（shRAB25）,应用定量实时聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）和蛋白印迹法检测RAB25的表达情况。应用细胞增殖与毒性检测法（CCK8）检测不同浓度的（0～20μmol/L）铁死亡诱导剂erastin对沉默RAB25后细胞活力的影响;利用荧光显微镜和透射电镜分别观察erastin对沉默RAB25后的细胞形态和线粒体结构的影响;使用C11-BODIPY染色和流式细胞仪检测erastin对沉默RAB25后的细胞脂膜过氧化水平的影响。检测erastin与西妥...     

IGF-1R抑制剂AG1024对头颈鳞癌FaDu细胞放射敏感性的影响

背景与目的:胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)在多数头颈鳞癌中高表达。本研究拟探讨IGF-1R抑制剂AG1024对头颈鳞癌FaDu细胞的放射增敏作用。以此探索IGF-1R联合放射治疗头颈鳞癌的疗效及可能机理,为临床寻找有效的以IGF-1R为靶点的肿瘤治疗方法提供实验依据。方法:以头颈鳞癌FaDu细胞为研究对象,克隆形成实验分析细胞放射敏感性,应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测AG1024对FaDu细胞早期凋亡及周期的影响。进一步应用γ-H2AX形成实验检测DNA双键断裂(double-strand breaks,DSBs)的修复情况;蛋白质印迹法(Western blot)及免疫沉淀法测定IGF-1R下游蛋白激酶B(protein B,Akt)和细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases1/2,Erk1/2)的活化水平,动物实验观察对肿瘤生长的影响。结果:AG1024联合放疗使细胞存活曲线的肩区明显变窄,反映放射敏感性指标的D0降低;FCM检测结果表明,AG1024联合放疗可增加FaDu细胞的早期凋亡水平(P<0.05),使细胞的G0/G1期比例增高(P<0.05),S期比例降低(P<0.05);在放射后24 h进一步的γ-H2AX形成实验显示,Ag1024能抑制DSBs的修复(P<0.05);同时,经AGl024处理后,细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)的表达水平明显降低;动物实验的结果显示药物联合照射能明显抑制肿瘤的生长。结论:IGF-1R抑制剂AG1024在体内和体外对头颈鳞癌FaDu细胞均有放射增敏作用,其机制可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡、抑制DSBs的修复、下调P13K/Akt及Ras/Raf/MAPK信号通路有关。