食管鳞癌恶性表型相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:利用蛋白质组学技术探讨与人食管鳞癌细胞(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)恶性表型转化相关的差异表达的蛋白质谱.方法:采用二维双向电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionisation timE-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)法鉴定人食管上皮永生化细胞株NECA-E6E7-hTERT和ESCC细胞株EC1、EC18、EC109差异表达的蛋白质分子,采用Western印迹法和免疫细胞化学法验证annexin A2在人食管上皮永生化细胞和ESCC细胞中的差异表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)分析annexin A2 mRNA的表达水平.结果:鉴定出5倍以上差异表达的蛋白质分子15个,其中3个蛋白质在ESCC细胞中表达下调,12个蛋白质表达上调;Western 印迹法和免疫细胞化学法验证了ESCC细胞中annexin A2蛋白的表达低于人食管上皮永生化细胞;而annexin A2 mRNA表达与其蛋白表达模式不一致.结论:本研究鉴定出的差异表达蛋白质谱为建立食管癌高发区高危人群筛查和早期诊断的分子指标和生物预防提供了重要线索.annexin A2翻译后调控可能是导致ESCC中annexin A2蛋白表达下调的主要原因.     

食管鳞癌多阶段癌变中14-3-3σ和P53表达特征及相关性分析

目的:探讨14-3-3σ和P53蛋白表达在食管鳞癌和癌旁正常黏膜上皮、各级癌前病变中的变化特征及相关性.方法:采用免疫组织化学方法检测14-3-3σ和P53蛋白在60例不同分化程度食管鳞癌和癌旁正常食管黏膜上皮、各级癌前病变中的表达变化.结果:癌旁正常食管黏膜上皮中均可检测到不同程度的14-3-3σ蛋白表达(表达量8.22),随着癌前病变进展,14-3-3σ的表达率和表达量逐渐下降;低分化鳞癌中14-3-3σ的表达量最低(表达量0.45),完全失表达率为64%(7/11).P53蛋白在鳞癌中表达率最高67%(27/40),表达量为4.86,而只有25%(6/24)癌旁正常上皮表达P53蛋白(表达量0.42).14-3-3σ和P53蛋白的相关性分析表明二者呈显著负相关(P＜0.05).结论:P53蛋白可能通过负调控14-3-3σ基因的表达参与食管癌变多阶段演进过程,14-3-3σ和P53可能成为食管癌早期诊断及高危人群筛查的分子指标,同时也可能成为食管癌生物预防和疗效评价的新靶点.