磷酸化蛋白质组学技术进展及其在预防医学中的应用

生物体能迅速对体内外环境的变化产生的应答反应依靠复杂的调控机制调节,而其中大多数调控机制是由蛋白质构象变化所介导的.蛋白质本身的构象变化常常通过边蛋白质结构上发生的各种共价修饰来实现,其中蛋白质磷酸化是最常见、最重要的共价修饰方式[1].在脊椎动物基因组中,有5%基因编码的蛋白质是参与到磷酸化和去磷酸化过程中的激酶(kinase)和磷酸酯酶(phsphatase)[2].     

乳腺癌预后的相关基因生物信息学分析

目的：通过对肿瘤基因组图谱计划（TCGA）基因表达谱和microRNA测序数据的生物信息学分析,寻找乳腺癌预后相关的关键分子事件。方法：收集并整理TCGA数据库中乳腺癌基因表达谱和microRNA测序数据,通过线性模型和经验贝叶斯方法结合传统t检验筛选乳腺癌中异常表达的基因和microRNA,利用R语言包microRNA-mRNA预测microRNA潜在靶向调控的基因。另外通过基因集富集算法（GAGE）分析预测microRNA及其潜在靶基因在乳腺癌中参与的异常信号调控通路;Cox回归风险模型探讨影响乳腺癌患者预后的关键分子事件。结果：共发现17 533个基因中有344个基因在乳腺癌中异常表达,同时鉴定了135个异常表达的microRNA;通过预测分析发现8个microRNA及31个潜在调控的靶基因参与了139条乳腺癌中异常变化的分子信号通路;Cox回归风险模型结果显示SFRP1表达升高提示预后良好（HR=0.9,P=0.015）,has-miR-342-5p单独作用对乳腺癌预后无明显影响（HR=0.99,P=0.144）,然而,交互作用研究显示,has-miR-342-5p抑制SFRP1表达时提示乳腺癌病人预后不良（HR=1.88,P=0.016）。结论：通过对TCGA乳腺癌基因表达谱和microRNA测序数据深入挖掘发现了乳腺癌中表达异常的microRNA及其靶基因,进一步分析了它们所参与的关键信号通路,并揭示has-miR-342-5p抑制SFRP1表达的分子事件发生时,乳腺癌病人预后较差。     

三氯乙烯药疹样皮炎肝脏自身免疫性指标分析

目的 探索三氯乙烯药疹样皮炎（occupational medicamentosa-like dermatitis induced by trichloroethylene,OMDT）引发的肝脏自身免疫情况。
方法 选取10例OMDT慢性期患者和5名门诊随访的治愈者作为研究对象,检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）和自身免疫性肝炎（AIH）相关免疫指标[免疫球蛋白（IgG）、抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（ASMA）、抗肝肾微粒体抗体（LKM-1）、抗肝溶质抗原1型抗体（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体（SLA/LP）、抗线粒体亚型-2抗体（AMA-M2）],比较、分析各指标在慢性期患者和治愈者中的水平。
结果 慢性期患者肝功能指标ALT活性中位数（49.5 U/L）高于临床参考值,但IgG浓度（4.74~11.32 g/L）均在参考值范围内,且自身抗体指标均为阴性。治愈者ALT活性中位数（10.0 U/L）在参考值范围内,但其中1人（20%）IgG浓度高于临床参考值,ANA阳性率为60%,其他自身抗体指标均为阴性。慢性期患者ALT活性中位数高于治愈者,而治愈者ANA阳性率高于慢性期患者,差异均有统计学意义（P < 0.05）。
结论 OMDT患者在慢性期期间虽然肝功能受损,但可能未发生自身免疫;治愈后肝功能基本恢复,部分自身免疫指标却可能升高。
     

同位素标记相对和绝对定量技术筛选石房蛤毒素毒性分子学研究

目的应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术筛选麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)中石房蛤毒素(saxitoxins,STX)的差异表达蛋白。方法以小鼠神经母细胞瘤N2a为受试对象,使用浓度分别为10-8 mol/L和10-9 mol/L的STX标准品和阳性对照NSP(10-10 mol/L)进行染毒。提取细胞蛋白、定量和酶解。iTRAQ标记后(其中114标记空白组、115标记浓度组1(STX10-8 mol/L)、116标记浓度组2(STX10-9 mol/L)、117标记阳性对照组(NSP10-10 mol/L)),进行LC-MS/MS分析。使用生物信息学方法对差异蛋白进行分析。结果与空白组相比,共筛选出184个差异表达蛋白。与PSP相关的蛋白共有22个。筛选出的差异表达蛋白参与10种生物学过程、4种分子类型。结论通过iTRAQ技术分析得到STX的差异表达蛋白,发现ABCB6、TLR8、TES、TIAM2可能是与STX毒素相关的蛋白分子。     

肠道病毒71型致轻症手足口病患儿血清蛋白质组分析

目的探讨肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-71)感染致轻症手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的致病机制,筛选相关的血清蛋白生物标志物。方法应用差异荧光双向电泳(Two-dimensional difference ingel electrophoresis,2D-DIGE)分析比较8例轻症手足口病儿童和8名健康儿童血清蛋白表达谱,以DeCyder V6.5软件分析得到有显著差异的蛋白质点,以基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定差异蛋白质。结果建立了轻症手足口病与正常对照的2D-DIGE图谱,经MALDI-TOF-MS/MS鉴定得到14个差异蛋白。与对照组相比,在轻症手足口病组中表达下调的是:Alpha-2-antiplasmin、Antithrombin-III、Vitamin D-binding protein、Fibrinogengamma chain、Apolipoprotein A-IV、Clusterin、Ig lambda chain C regions、Apolipoprotein A-I、Transthyretin、ApolipoproteinC-III、Apolipoprotein A-II;表达上调的是:Leucine-rich alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin、Serum amyloid A protein。结论鉴定得到EV-71感染后轻症手足口病患者血清中差异表达的多种蛋白,这些与炎症反应、免疫应答和神经系统相关蛋白质的差异表达与病毒的感染和宿主的防御过程有关,为进一步研究EV-71致病机理提供一定的理论基础,也为寻找潜在的治疗靶点提供了思路。     

黏液型与非黏液型铜绿假单胞菌的比较蛋白组学分析

目的 探讨黏液型与非黏液型铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a)的差异蛋白谱,以发现黏液型P.a潜在的生物标志物.方法 采用来自于临床囊性纤维化患者分离的3株黏液型P.a菌株,脉冲场凝胶电泳以确定它们的同源性;采用同位素相对和绝对定量标记(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2D LC-MS/MS)技术分析3株黏液型与对照组1株非黏液型P.a的差异蛋白谱,并采用RT-qPCR方法对5个共同差异蛋白进行验证.结果 3株黏液型P.a菌株不具有同源性,iTRAQ结果没有明显差异.3组共有219个上调和101个下调差异蛋白.pa2815、pa2018、dnak、pa5046和acef基因转录水平与iTRAQ结果一致.结论 不同黏液表型P.a的iTRAQ结果没有明显差异,219个上调和101个下调差异蛋白可以作为研究黏液型与非黏液型P.a致病机制的候选生物标志物.     

深圳市老年人群社会支持现状及影响因素分析

目的调查深圳市老年人群,探讨深圳市老年人的社会支持现状及其影响因素。方法选取2017年7月—2018年10月在深圳市某医院体检的7201例老年人(≥60岁)作为调查对象。采用问卷调查、体格检查及实验室检测的方法收集人口学资料、患病史,采用社会支持评定量表(SSRS)评价社会支持度,采用logistic回归模型分析老年人社会支持现状的影响因素。结果7201例老年人社会支持总得分为(39.51±7.89)分,其中主观支持得分为(25.51±3.75)分,客观支持得分为(6.84±3.92)分,支持利用度得分为(7.17±2.95)分。logistic回归分析结果显示,年龄越低、社会支持得分越高(OR=0.771,P<0.001);社会支持得分等级由高到低至少降低1个等级,男性的风险是女性的1.302倍,小学及以下学历者是大专及以上学历者的1.228倍,家庭年收入<8万、8万~<12万、12~<16万人群分别是≥16万人群的1.572倍、1.599倍、1.616倍,未婚/离异/再婚/同居者是已婚者的1.949倍,无规律锻炼者是规律锻炼者的1.381倍(P均<0.05)。结论深圳市老年人群社会支持处于中等以上水平,女性、低年龄、受教育程度高、家庭年收入高、已婚、规律锻炼为老年人获得更高社会支持度的保护性因素。     

深圳市老年人群高血压合并糖尿病患病率及影响因素研究

目的 探讨深圳市年龄≥60岁老年人群高血压合并糖尿病患病率及其影响因素。 方法 于2017年7月至2018年10月期间,采用整群抽样的方法选择深圳市罗湖区下辖全部51个社区健康服务中心所有年龄≥60岁深圳户籍常住居民开展调查,采用面对面问卷调查、体格检查和实验室检测的方法收集相关信息。 结果 本调查共纳入7 982名老年人进行调查,平均年龄为（67.68 ± 5.41）岁,女性偏多,占57.2%。共检出高血压合并糖尿病患者1 257例,患病率15.7%。多因素logistic回归分析显示,年龄70~79岁（OR=2.60）、80~92岁（OR=3.91）、超重（OR=1.82）、肥胖（OR=4.16）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）异常（OR=2.12）、患高脂血症（OR=1.59）的老年人患高血压合并糖尿病的可能性较高;文化程度越高、新鲜水果、大米以及豆制品食用频次越多的老年人患高血压合并糖尿病的可能性较低;与小学及以下文化程度相比,高中/中专、大专/本科及以上文化程度的OR值分别为0.82、0.65;与<4次/月组相比,新鲜水果的食用频次4~11次/月、≥12次/月的OR值分别为0.55、0.46;与<12次/月组相比,大米的食用频次≥12次/月的OR值为0.46;与<4次/月组相比,豆制品的食用频次≥12次/月的OR值为0.80。 结论 深圳市老年人群高血压合并糖尿病患病率较高,高龄、超重、肥胖、HDL-C异常和患高脂血症是老年人患高血压合并糖尿病的危险因素;文化程度较高、摄入较多的新鲜水果、大米和豆制品可能是其保护因素。