含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的假型逆转录病毒的构建及包装

研究将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因应用于基因治疗。构建、包装含CD基因的假型逆转录病毒。构建含CD基因的逆转录病毒重组表达载体pLCDSN基础上，以重组表达载体pLCDSN转染包装细胞PA317，pLCDSN整合入PA317染色体中。结果：CD基因获得表达且包装出具有感染能力的假型逆转录病毒。以该假型逆转录病毒感染NIH／3T3细胞，逆转录病毒重组表达载体pLCDSN整合入NIH／3T3细胞染色体中，CD基因获得表达。5－FC对有CD基因表达的包装细胞PA317（pLCDSN）和NIH／3T3（pLCDSN）产生杀伤毒性。结论：我们已成功地构建、包装了含重组逆转录病毒载体pLCDSN且具有感染能力的假型逆转录病毒。该工作为以逆转录病毒介导的CD基因应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。     

含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的假型逆转录病毒的构建及包装

研究将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因应用于基因治疗。构建，包装含ＣＤ基因的假型逆转录病毒。构建含ＣＤ基因的逆转录病毒重组表达载体ＰＬＣＤＳＮ基础上，以重组表达载体ＰＬＣＤＳＮ转染包装细胞ＰＡ３１７，ＰＬＣＤＳＮ整合人ＰＡ３１７染色 。结果：ＣＤ基因获得表达且包装出具有感染能力的假型逆转录病毒。以该假型逆转录病毒染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞，逆转录病毒重组表达载体ＰＬＣＤＳＮ整合入ＮＩＨ／３Ｔ３细胞染色体     

5—FC对经基因修饰而表达胞嘧啶脱氨酶的哺乳类细胞杀伤作用

为获得５┐氟胞嘧啶（５┐ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５┐ＦＣ）对含ＣＤ基因哺乳类细胞的“诱导”杀伤表型数据。方法小鼠成纤维细胞ＮＩＨ／３Ｔ３、大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６和包装细胞ＰＡ３１７，经基因修饰而表达非哺乳类酶－胞嘧啶脱氨酶（ｃｙ┐ｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）。结果体外，ＣＤ基因的表达几乎不影响细胞的生长速率。薄层层析分析（ＴＬＣ）表明，被含有重组逆转录病毒载体ｐＬＣＤＳＮ的假型病毒感染的哺乳类细胞及包装细胞的抽提液可将胞嘧啶代谢成脲嘧啶。５┐ＦＣ对有ＣＤ活性的细胞产生致死性细胞毒性。结论本实验支持了在５┐ＦＣ参与下，于肿瘤细胞内选择性表达ＣＤ的基因治疗方案。