CPNE5对NF-κB转录调控活性的影响

目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制.方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响.结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力.结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性.     

CPNE5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响

[目的]研究CPNE5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中,经TNF-α处理后,用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响。[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性。[结论]CPNE5的A结构域能够剂量依赖性抑制NF-κB的转录激活活性。     

Mile's手术后无胃肠减压78例临床分析

目的 探讨胃肠减压在腹会阴联合直肠癌根治术(Mile's)后的应用价值.方法 对78例直肠癌病人实施Mile's手术,太后不行胃肠减压,观察病人术后胃肠功能功能恢复情况及并发症.结果 接受Mile's手术、术后未行胃肠减压的病人术后胃肠内功能恢复无异常,呼吸道及消化道并发症发生率低.结论 胃肠减压对Mile's手术后病人胃肠功能恢复无明显作用,并可引发多种并发症.我们建议Mile's手术后可不常使用胃肠减压.     

平阳霉素胸腔内注射治疗肺癌胸腔积液的探讨

据报道，胸腔置管引流术治疗恶性胸腔积液疗效明显优于间断抽液治疗，平阳霉素胸腔内注射治疗恶性胸腔积液已屡有报道，但其疗效报告不一。影响疗效的原因，除了病例的选择标准不一外，可能与胸腔内给药的方法有密切的关联。为寻求非小细胞肺癌大量癌性胸腔积液安全有效的治疗方法，我科进行了胸腔内导管引流术后联合平阳霉素胸腔内注射治疗非小细胞肺癌癌性胸腔积液的临床疗效观察，现报告如下。     

外源蛋白在CHO细胞染色体上一个新位点的定点整合和稳定表达

寻找中国仓鼠卵巢（CHO）细胞染色体上稳定表达位点是解决CHO细胞长期培养表达不稳定问题的有效手段。本课题组前期利用慢病毒转染将示踪基因（Zsgreen1）整合CHO细胞染色体上并发现多个潜在稳定表达位点。本研究验证了其中一个位点稳定表达外源蛋白的能力,该位点位于染色体NW_003614241.1上148 052～148 157 bp区域。首先观察Zsgreen1基因的表达情况,随后采用CRISPR/Cas9技术将增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点整合至该位点,获得3株EGFP基因定点整合的细胞,经60代悬浮培养,细胞荧光强度无明显变化,证明此位点可稳定表达EGFP基因。采用同样方法构建了表达人血清白蛋白（HSA）基因的重组CHO细胞株,经Western blot验证,此位点可分泌表达HSA,表明上述位点可定点整合和稳定表达外源蛋白。