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应用本室纯化的重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)对悬浮的人白血病细胞HL-60和K562小鼠骨髓瘤细胞NS-1以及贴壁的小鼠纤维母细胞L929和人肝癌细胞SMMC7721进行了微量细胞毒试验,其中悬浮细胞采用~3H-TdR掺入法;贴壁细胞采用结晶紫染色法分别检测.实验表明,此rhTNF-β对HL-60有很强的杀伤作用;NS-1为相对敏感细胞株;而对SMMC7721及K562的杀伤率很低,具有一定抗性.与此同时,作者还应用FDA-PI荧光染色,用荧光显微镜,扫描电镜及透射电镜观察,DNA电泳以及流式细胞仪对细胞周期和凋亡百分率的检测等实验,进一步研究了rhTNF-β对L929和 相似文献
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应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni~(2 )-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2~2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0~6.6)×10~6U/map. 相似文献
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本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株(P20KLT)按常规培养及扩增.即采用LB培养液(内含Amp100.μg/ml Tet 5μg/ml);1:40扩增.当A550达0.1时,加入IAA(20μg/ml),当A550为1.0时,中止培养,离心(5000rpm,4℃)收集菌体。在菌体中按1:5加入缓冲液,冰浴中超声破碎,13,000rpm高速离心20分钟, 相似文献
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艾氏腹水癌细胞对胸腺淋巴细胞钻瘤作用的敏感性 总被引:2,自引:0,他引:2
在离体混合细胞培养中,发现胸腺淋巴细胞能主动向艾氏腹水癌(EAC)细胞移动、相互粘附,並钻入瘤细胞内。其粘瘤和钻瘤指数的基本规律一致,但不同步,不同瘤龄期以及有无Con A刺激的瘤细胞对淋巴细胞的粘瘤和钻瘤作用的敏感性不同,胸腺淋巴细胞及其PNA~-和PNA~+亚群与脾脏淋巴细胞亦有显著差异。胸腺素对淋巴细胞的粘瘤和钻瘤作用有一定的促进作用。 相似文献
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根据当前较多研究者的看法,肿瘤宿主不能有效地排斥肿瘤,并非由于其免疫系统在功能上有缺陷,而是免疫调节异常所致。这种异常现象主要表现在向下调节(down fegulation)占了优势,从而导致了低免疫状态(depressed immunity)。这可能是宿主对肿瘤排斥失效的原因之一。已知参与免疫调节的成分(调节细胞和调节分 相似文献
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目的:探讨活性氧参与rhTNFβ诱导淋巴细胞活化作用的机理。方法:采用化学发光(CL)和顺磁共振法(ESR)研究rhTNFB诱导人外周血淋巴细胞产生活性氧(OR)的动态变化及其增殖作用。结果:①用10-2000U/ml的rhTNFβ处理1×106ml-1淋巴细胞均可诱发Ly-CL,其中以100U/ml rhTNFβ处理18~20min的CL峰值(RLI)为最高,所诱发的OR主要为OH·;②以15~62U/ml的rhTNFβ处理淋巴细胞72h,可明显地产生活化效应,这与TNFB诱发淋巴细胞早期产生Ly-CL的强度相一致。结论:适当剂量的rhTNFβ可诱导人外周血淋巴细胞产生OR并促进其增殖。 相似文献
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<正> 机体免疫状态对肿瘤的发生发展有着密切的关系。带瘤机体的免疫功能随着瘤龄的增长而逐渐降低。胸腺是T淋巴细胞发育,特别是受体功能库及自我识别限制能力获得的主要场所。研究T细胞分化的基本手段是分离出胸 相似文献
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淋巴毒素β(LTβ),TNF家族的新成员.由括化的T、NK、LAK细胞和T细胞杂交瘤等产生,LTβ是一个分子量为33KD的Ⅱ型跨膜糖蛋白.分泌型的淋巴毒素LTα通过与LTβ非共价结合而锚着于细胞表面,共同形成表面淋巴毒素.这意味着淋巴毒素可能具有不同于TNF的独特生物学功能,因而淋巴毒素引起了人们的广泛关注.本文对LTβ分子的表达及其特征、基因结构和受体等方面的研究进展作一综述。对LTβ的深入研究将成为免疫学中的一个新课题. 相似文献