曲酸诱导CHO-K1细胞凋亡的研究

目的研究曲酸诱导细胞凋亡的作用。方法采用0、500、1000、1500、2000、2500μg/ml的曲酸染毒CHO-K1细胞,每种浓度条件下分别培养细胞24、48、72、96h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果流式细胞仪检测结果显示,细胞培养24、48h,未呈现明显的细胞凋亡现象;细胞培养72h,细胞凋亡也非常微弱,其剂量-效应关系不明显。但细胞培养96h,曲酸剂量与细胞凋亡比例呈现明显的剂量-效应关系,曲酸浓度为0、500、1500、2500μg/ml,凋亡早期的细胞比例分别为0.1%,7.3%,45.4%和62.2%。结论曲酸培养CHO-K1细胞96h呈现明显的诱导细胞凋亡效应,而在染毒早期几乎不呈现诱导效应。     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

微囊藻毒素-LR对小鼠单核细胞和淋巴细胞的影响

目的 探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)对小鼠血液中单核细胞和淋巴细胞的影响及毒性效应,筛查血液中早期灵敏效应指标.方法 1月龄SPF级雄性昆明小鼠按体重采用随机数字表法分为5组,每组7只,分别分为对照组、低剂量组、中低剂量组、中高剂量组、高剂量组,每天给予1次腹腔注射染毒,分别给予生理盐水及3.125、6.250、12.500、25.000 μg/kg剂量的MC-LR.染毒7d后采用放射免疫方法检测重要相关细胞因子,KCl-SDS沉淀法检测淋巴细胞DNA-蛋白质交联(DNAprotein crosslinks,DPC)情况,流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能及单核细胞和淋巴细胞的活性氧变化(reactive oxygen species,ROS),并分析其变化情况.结果 中低、中高和高剂量MC-LR染毒组小鼠白细胞介素-6[分别为(346.837±25.536)、(360.847±37.886)、(434.245±35.858) pg/ml]均高于对照组[(232.775±32.816) pg/ml](t值分别为-7.258、-6.760、-10.966,P值均＜0.05);高剂量组肿瘤坏死因子-α含量[(10.782±0.966) fmol/ml]低于对照组[(16.878±3.378) fmol/ml](t=4.591,P＜0.05).中低和高剂量组淋巴细胞DPC[分别为(242.576±7.545)、(241.472±2.793) ng/ml]高于对照组[(228.657±4.130) ng/ml](t值分别为-4.282、-6.801,P值均＜0.05);低、中低、中高和高剂量组淋巴细胞DCF荧光强度(依次为3299.37±120.54、3281.38±58.34、3308.06±136.12、3346.92±108.69)均低于对照组(3770.81±131.39)(t值分别为6.995、9.007、6.472、6.577,P值均＜0.05).低、中低、中高和高剂量单核细胞DCF荧光强度(依次为3271.51±140.79、3270.05±117.92、3326.90±114.39、3292.49±145.97)均低于对照组(3841.72±130.92)(t值分别为7.847、8.584、7.835、7.411,P值均＜0.05).其他检测指标未见明显改变.结论 在体内实验中,可观察到MC-LR对血液中单核细胞和淋巴细胞有一定的影响.经比较,白细胞ROS为本实验中最灵敏效应指标.     

水中微量藻类毒素免疫亲和层析法分离

微囊藻毒素-LR( microcystin-LR,MC-LR)是淡水水华过程中由某些种系蓝藻产生的一类天然毒素,其毒性作用表现为肝脏毒性和肿瘤促进作用等[1],对人体健康危害极大.中国颁布执行的GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》规定了水中MC-LR的限值为0.001 mg/L.目前,水中MC-LR常用检测方法有ELISA方法和高效液相色谱法.     

武汉市区主要湖泊微囊藻毒素-LR污染现状调查

目的 了解武汉市区主要湖泊水中微囊藻毒素的污染状况及随时间变化的规律.方法 于2008年6-10月及2009年4、5月,对武汉市内南湖、东湖、沙湖、北湖、菱角湖、中山湖、莲花湖、墨水湖、月湖9个主要湖泊11个采样点(东湖设3个采样点)进行水样的采集.水样经过滤、反复冻融等处理,分离细胞内和游离藻毒素.通过反相C<,18...     

曲酸对Vero及CHO-K1细胞毒性作用

目的探讨曲酸对传代细胞的毒性效应。方法用不同浓度曲酸染毒Vero及CHO-K1传代细胞株,采用噻唑蓝MTT显色法于不同染毒时间终点观察细胞毒性变化。结果细胞与受试物接触24 h之内,曲酸浓度750μg/mL,Vero细胞株对曲酸反应与阴性对照无明显差异,但随着剂量加大,毒性反应逐渐增强;随着作用时间延长,曲酸对细胞的毒性不断加大,细胞培养48 h,曲酸半数抑制效应(IE50)为2 000μg/mL;细胞培养72 h,曲酸IE50≤500μg/mL;改变起始染毒方式,对细胞毒性效应无明显影响;CHO-K1细胞株经1 000μg/mL曲酸染毒后,培养24 h,出现轻微抑制现象;培养48h,细胞毒性作用明显,培养72,96 h毒性反应最强烈。结论曲酸对受试细胞株具有明显毒性作用,且有明显剂量-效应和时间-效应关系。