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应用柱层析法分离眼镜蛇毒,对各组份进行了蛋白水解酶、胆碱酯酶和磷脂酶A活力测定。结果表明,广东产的眼镜蛇毒与湖南产的眼镜蛇毒各组份三种酶活力的分布有所不同。 相似文献
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目的:构建IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内IP10的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建含IP10启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-IP10;用脂质体瞬时转染HEK293 细胞,观察IP10启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应.结果:酶切和DNA 测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在HEK293细胞静息状态下表达水平很低,经LPS 刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光.结论:所构建的IP10启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于IP10基因表达信号调控机制的研究. 相似文献
3.
目的:分离纯化东亚钳蝎原毒,提取活性多肽成分SVⅡ—A4,并观察其抑瘤活性。方法:(1)分离纯化,采用分子筛凝胶柱层析和离子交换柱层析分离纯化蝎毒;(2)纯度分析,用SDS—PAGE电泳和HPLC色谱法对SVⅡ—A4进行纯度分析;(3)活性观察,用MTF法(酶反应比色法)观察比较不同浓度(1、10、100mg/L)的蝎毒及其成分与SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞(A549、HL-60、K562/S及K562/ADR)的抑制作用。结果:经过两步的分离纯化获得5个蝎毒多肽成分,其中的蝎毒抗肿瘤有效成分SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞的抑制作用与阳性对照组相当。结论:经过优化提纯方法,两步即可从东亚钳蝎原毒中获得色谱纯度达96.73%的抑瘤活性单体成分SVⅡ-A4,初步观察,SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞均显示出明显的抑制作用及一定的剂量-效应关系,而且它对布耐药细胞株(K562/ADR)的抑制作用较阳性对照组强有进一步开发利用的价值。 相似文献
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目的:采用flag标记的人FAT10蛋白研究人FAT10蛋白对HEK293细胞的影响。方法:将FAT10基因片段克隆到载体pcDNA3-flag上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染HEK293细胞,用Western blotting方法检测外源性FAT10正常培养状态和饥饿状态下的HEK293细胞中的表达情况;并用XTT法和DNA ladder法观察正常培养和饥饿状态下HEK293细胞的凋亡情况。结果:重组质粒在HEK293细胞中高效表达,但在正常培养状态下和饥饿状态下表达情况不同。饥饿状态下,过表达FAT10的HEK293细胞存活率显著低于对照细胞,并且出现DNA ladder现象。结论:成功构建了带Flag标签的FAT10真核表达质粒,可在HEK293细胞中高效表达;FAT10过表达促进饥饿状态的HEK293细胞发生凋亡。 相似文献
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卵黄中蝮蛇蛇毒抗体对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:制备特异性高的蝮蛇蛇毒卵黄抗休事半功倍对其体内保护和体外保护作用进行了研究。方法:用蝮蛇蛇毒作为抗原免疫鸡,使之在蛋黄中产生抗体IgY,然后用聚乙二醇法提取IgY,并通过小鼠体内保护和体外中和试验。研究IgY对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用。结果:通过本法制得的IgY在体内和体外试验中都能中和蝮蛇蛇毒,对蝮蛇蛇毒急性中毒的小鼠有明显的保护作用。结论:聚乙二醇法从免疫鸡蛋黄中提取的蛇毒抗体IgY,可用于救治蝮蛇蛇毒急性中毒的小白鼠。 相似文献
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目的 探讨增强型绿色荧光蛋白质粒(EGFP)在大鼠骨骼肌微血管通透性增加的条件下表达的可行性.方法 20只清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机均分为裸质粒组(P)、质粒 超声组(P U)、质粒 微泡组(P M)和质粒 超声 微泡组(P U M)共4组进行实验.选择增强绿色荧光蛋白质粒与白蛋白微泡相混合,以超声介导白蛋白微泡破裂的方法 对大鼠骨骼肌行基因转染,转染7 d后,荧光显微镜下观察质粒在大鼠脊斜肌组织中的表达情况.结果 P、P M组大鼠脊斜肌组织中均未见增强型绿色荧光蛋白表达;P U组可见少量微弱绿色荧光,荧光强度较P和P M组明显增强(P<0.05),P U M组可见明显特异性增强型绿色荧光蛋白表达,荧光强度约为P、P M组的10倍,P U组的3倍(P<0.05);P U M组转染率为(42.72±10.07)%较之P U组(13.62±6.17)%明显增高(P<0.05).结论 超声介导微泡造影剂破裂造成的脊斜肌组织毛细血管通透性的增加,是血管内基因成功跨越内膜屏障的主要途径之一. 相似文献
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卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性。方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析。结果检测的灵敏度可达32μg.L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32~750μg.L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500μg.L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100μg.L-1)、中(300μg.L-1)、高(1 000μg.L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%~3%之内,板间变异系数在8%以内。结论特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点。该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据。 相似文献
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眼镜蛇毒直接溶解因子对人肝癌细胞株H7402产生NO和LPO的影响 总被引:10,自引:1,他引:10
目的:研究眼镜蛇毒直接溶解因子(DLF)对人肝癌细胞株H7402产生一氧化氮(NO)和脂质过氧化物(LPO)的影响。结果:DLF对体外培养的H7402细胞有杀伤作用,IC50为247mg·L-1,DLF与H7402细胞的生长抑制率呈量效关系。DLF可介导H7402细胞产生大量NO2,NO2量与DLF的剂量呈量效关系。在一定剂量范围内NO2量与H7402的生长抑制率呈显著正相关。用570型粘附式细胞仪测定单个细胞内LPO,发现DLF可使H7402细胞内LPO产生增加。结论:DLF可杀伤H7402细胞,其部分机制可能是通过诱导肿瘤细胞产生NO和LPO。 相似文献