辐射诱变对阳春砂果实挥发性萜类成分合成的影响

目的:分析辐射诱变对阳春砂果实中挥发性萜类成分的影响,为阳春砂辐射诱变育种提供实验依据.方法:提取辐射诱变株系和对照株系果实鲜品中果皮和种子团的挥发性萜类成分,采用GC-MS法分析挥发性萜类成分的种类和含量.结果:辐射诱变可提高阳春砂种子团中α-蒎烯、β-蒎烯、异松油烯、y-萜品烯、β-石竹烯、檀香烯的含量,挥发性萜类...     

阳春砂DXR超表达提高转基因烟草DXR活性及光合色素含量

【目的】筛选阳春砂1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)(AvDXR)转基因烟草T1代植株,鉴定AvDXR基因在模式植物烟草中的功能。【方法】采用抗生素、聚合酶链反应(PCR)法筛选转基因烟草T1代植株;采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法分析目的基因在T1代转基因烟草中的表达情况,采用分光光度法测定酶活性和光合色素含量。【结果】经过抗生素筛选和PCR检测获得AvDXR基因稳定遗传的转基因烟草T1代;AvDXR在部分T1代植株中得到超表达;经测定超表达植株中的DXR活性和光合色素含量均有提高。【结论】AvDXR超表达提高了转基因烟草DXR活性和光合色素含量,获得的AvDXR超表达植株可作为进一步分析萜类成分的材料。     

茉莉酸甲酯调控阳春砂HMGR、DXR和DXS基因表达

[目的]探讨茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate,MeJA)调控阳春砂萜类化合物生物合成途径3个关键酶基因HMGR、DXR、DXS表达的规律.[方法]用20 μmol/L和200 μmol/L高、低2个浓度的MeJA喷施阳春砂幼苗,诱导不同时间后取样,提取RNA,采用荧光定量PCR法测定AvHMGR、AvDXR、AvDXS相对表达量.[结果]MeJA对AvHMGR、AvDXR和AvDXS的表达均有促进作用,其中对AvDXR的促进作用最明显,AvHMGR次之,两者最高表达量分别达到处理前的9.40和3.95倍;AvDXR基因受高、低浓度MeJA的诱导表达均十分明显,而AvHMGR基因仅对低浓度MeJA敏感,AvDXS基因对高、低浓度的MeJA均不敏感;AvHMGR和AvDXR的表达量在诱导后24 h达到最高峰,在72 h恢复到处理前水平.[结论]诱导子MeJA对AvDXR和AvHMGR基因表达的调控是激发式的,基因表达迅速上调到一定水平,而后逐渐回落.     

穿心莲实时定量PCR分析中内参基因的选择

[目的]选择合适的内参基因用于穿心莲实时定量PCR分析中的校正.[方法]以穿心莲根、茎、幼叶、花、萌发种子和成熟叶片为实验材料,应用实时定量PCR技术分析18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、肌动蛋白(Actin)和泛素连接酶(UBC)4个常用内参基因在穿心莲不同组织中的表达水平,利用GeNorm和NormFinder软件进行数据分析.[结果]4个候选内参基因在穿心莲不同组织中表达的稳定性各异,其中UBC的表达水平最为稳定.[结论]可以选择UBC作为内参基因,用于穿心莲不同组织中基因表达水平的校正.     

阳春砂HMGR和DXR在烟草中单独及共同过量表达调控萜类化合物的生物合成

目的：HMGR 和 DXR 分别是萜类生物合成途径———MVA 和 MEP 途径的关键酶,本研究探讨阳春砂AvHMGR 和AvDXR 在转基因烟草中的过量表达对不同萜类化合物生物合成的影响。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术分析AvHMGR 和AvDXR 的表达水平,应用专一底物法测定HMGR 和DXR 的酶活性,利用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术检测不同萜类化合物的变化。结果：AvHMGR 或AvDXR 单独过量表达抑制了HMGR 和DXR 的活性,提高了五针松烯、新植二烯、薄荷烯和甾醇的含量;而AvHMGR 和AvDXR 共同过量表达对不同植株中酶活性的影响有差异,提高了甾醇和植醇的含量,但抑制了新植二烯的积累。结论：AvHMGR 和AvDXR 单独或共同过量表达对烟草中不同萜类化合物的合成调控存在差异,同时也证明了MVA 和MEP 途径并不完全独立,而是有着相互交流,本研究为利用阳春砂AvHMGR 和AvDXR 进行萜类化合物的代谢调控提供了依据。