右归丸通过调节CXCL8/CXCR1/2信号通路及Ang-1，Ang-2表达促进大鼠卵巢血管生成的作用

目的:研究补肾中药复方右归丸对自然衰老致卵巢功能低下的大鼠血管生成的影响与CXC趋化因子8(CXCL8)/趋化因子受体1/2(CXCR1/2)信号通路及血管生成素-1(Ang-1),血管生成素-2(Ang-2)的关系,探讨其改善卵巢功能的作用机制。方法:将56只雌性SD大鼠随机分为青年组8只、自然衰老致卵巢功能低下的雌性大鼠模型组48只,青年组大鼠常规饲养,48只模型组大鼠常规饲养过程中做5~7 d阴道脱落细胞学涂片,将连续4个动情周期阴道细胞学表现为动情周期长、之后持续动情、反复假妊娠的大鼠作为初老大鼠,连续10 d表现为角化细胞指数高于50%的青年大鼠作为青年组。模型建立后,将存活造模大鼠随机分为初老空白组,结合雌激素组(65μg·kg^-1·d^-1),左归丸组(33 g·kg^-1·d^-1),右归丸低、中、高剂量组(1.2,2.4,4.8 g·kg^-1d^-1),青年组和初老空白组以等体积生理盐水灌胃,持续30 d。实验结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠卵巢组织形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2的蛋白表达水平;免疫组化标记大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2 mRNA表达。结果:与青年组比较,初老空白组各级生长卵泡数、黄体数、血管数目数量少且闭锁卵泡多(P<0.01),卵巢组织CXCL8,CXCR1及CXCR2水平蛋白和mRNA水平显著上升(P<0.01),卵巢组织中Ang-1及Ang-2蛋白和mRNA水平明显下降(P<0.05);与初老空白组相比,各用药组初老大鼠的各级生长卵泡数、黄体数、血管数目明显增加(P<0.05),而闭锁卵泡数明显减少(P<0.05),卵巢组织CXCL8,CXCR1及CXCR2水平蛋白和mRNA水平明显下降(P<0.05),卵巢组织中Ang-1及Ang-2蛋白和mRNA水平明显上升(P<0.05)。结论:右归丸可以通过下调大鼠卵巢组织中CXCL8,CXCR1及CXCR2水平,上调Ang-1和Ang-2水平,促进卵巢血管生成,改善大鼠的卵巢功能。     

左归丸对大鼠卵巢血管生成与胎盘生长因子、肝细胞生长因子及其受体关系的影响

目的?观察左归丸对初老大鼠卵巢中胎盘生长因子（PLGF）及酪氨酸激酶受体（Flt-1）和肝细胞生长因子（HGF）及间质上皮细胞转化因子（c-Met）受体表达的影响。方法?初老大鼠40只按随机数字表法分为模型组、结合雌激素组、左归丸11、33 g/kg剂量组，每组10只，另取10只4月龄大鼠作为正常对照组。正常对照组以蒸馏水20 g/kg灌胃；结合雌激素组灌胃65 μg/kg结合雌激素混悬液；左归丸11、33 g/kg组分别灌胃左归丸浸膏11、33 g/kg，1次/天，连续20天；观察大鼠生殖器官形态学变化，计算卵巢、子宫、阴道脏器指数，采用免疫组化法及Western Blot法检测大鼠卵巢 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白表达水平，原位杂交技术检测PLGF、Flt-1、HGF、c-Met mRNA表达水平，ELISA 法检测雌二醇（E2）、孕激素（P）、促卵泡生成激素（FSH）水平。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数多，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P含量明显降低，FSH含量明显升高，大鼠卵巢PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著降低（P<0.01)；与模型组比较，左归丸11、33 g/kg组及结合雌激素组的生长卵泡数、黄体数、血管数增多，闭锁卵泡数明显减少，卵巢指数、子宫指数、阴道指数及E2、P水平明显升高，FSH水平明显降低，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；与结合雌激素组比较，左归丸33 g/kg组E2、P升高（P<0.05 ），左归丸11、33 g/kg组中生长卵泡数、黄体数、血管数更少，闭锁卵泡数更多，卵巢、子宫、阴道指数，FSH水平，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；与左归丸11 g/kg组比较，左归丸33 g/kg组生长卵泡数、黄体数、血管数增多，锁卵泡数减少，卵巢、子宫、阴道指数及E2、P水平均有所上升，FSH水平下降，PLGF、Flt-1、HGF、c-Met蛋白及mRNA水平升高（P<0.05，P<0.01）。结论?左归丸可能通过上调 PLGF、Flt-1、HGF、c-Met 蛋白及mRNA水平，促进初老大鼠卵巢血管生成，进而改善大鼠卵巢功能，且高剂量优于低剂量。