通咽喷雾剂改善线栓法短暂性大脑中动脉阻塞大鼠吞咽困难的实验研究

目的研究通咽喷雾剂对线栓法短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)模型大鼠吞咽功能的改善并初步探讨其作用机理。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和药物组,后两组采用线栓法短暂性阻塞大脑中动脉90分钟造模,药物组给予通咽喷雾剂治疗14天。于造模后第7天、第14天记录各组大鼠在相同时间内由蒸馏水引发的吞咽次数和吞咽反应时间;ELISA法检测各组血清P物质(substance P,SP)含量;免疫组化法检测各组延髓孤束核内P物质(substance P,SP)、5-羟色胺(serotonin,5-HT)含量。结果造模后第14天模型组大鼠吞咽次数减少(P0.01)、吞咽反应时间延迟(P0.05),药物组吞咽次数增加(P0.05);模型组血清SP含量降低(P0.01)、延髓孤束核内SP及5-HT阳性神经纤维含量减少(P0.05,P0.01);药物组血清SP含量增加(P0.05),延髓孤束核内SP及5-HT阳性神经纤维含量增加(P0.05,P0.01)。结论通咽喷雾剂可改善t MCAO大鼠的吞咽功能,其作用机制可能与增加血清SP及孤束核内SP与5-HT阳性神经纤维含量,激活辣椒素敏感类神经有关。     

10月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马超微结构特征的观察

目的:观察APP/PS1双转基因小鼠海马内Aβ沉积的形态特征。方法:以10月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠和C57BL/6小鼠为研究对象,采用Aβ免疫组化和透射电镜技术,观察海马部位Aβ的沉积情况及相关的病理特征。结果:在双转基因小鼠海马内存在致密性神经炎性斑块及营养障碍性突起,但脑微血管壁的Aβ沉积不甚明显;营养障碍性突起及神经细胞、微血管内皮细胞、周细胞内存在大量的自噬泡及次级溶酶体,提示该模型存在自噬溶酶体途径功能紊乱。结论:该鼠模拟了AD的老年斑及相关退行性变等病理改变,其中可能伴有细胞多种代谢的变化及血脑屏障功能的变化。从老年斑角度而言,该动物是成功的阿尔茨海默病动物模型,可用于AD的生化、病理研究及新治疗方法的探索。     

低频电针“胃脘下俞”对2型糖尿病大鼠胰腺形态和分泌功能的调控作用研究

目的:观察低频电针"胃脘下俞"穴对2型糖尿病大鼠胰腺形态和分泌功能的调控作用,从保护胰岛B细胞、维持胰腺分泌功能的角度探讨电针干预2型糖尿病高血糖的机制。方法:选取雄性SD大鼠以高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。成模动物根据空腹血糖随机分为模型组、电针组,并与空白组进行对照。电针组以强度2 mA、频率2 Hz的低频电针"胃脘下俞"穴,6次/周,4周进行干预。空白组和模型组不干预。于全部干预结束后检测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素含量,计算胰岛素分泌指数(HOMA-B),判断电针对胰腺分泌功能的调控作用;取大鼠胰腺组织进行HE染色及Masson染色,观察电针对胰腺形态学的调控作用;取大鼠胰腺组织以Western blot法检测GLP-1受体含量,探讨电针干预效果的机理。结果:低频电针"胃脘下俞"可显著提高2型糖尿病模型大鼠显著降低的胰岛素分泌指数(P0.05),且能改善胰岛形态,上调模型大鼠显著下降的胰腺GLP-1受体表达。结论:低频电针"胃脘下俞"穴对2型糖尿病大鼠胰腺形态、功能具有正向调控作用,上述作用可能与电针对胰腺GLP-1受体的调控有关。     

直肠半结扎模型大鼠的病理改变

目的探讨"肺合大肠"中医脏腑相关理论实验基础。方法复制大鼠直肠半结扎模型,观察心、肝、肾、肺和肠等器官的形态学改变,观察肺泡灌洗液细胞分类计数变化以及大承气汤的干预效果。结果解扎组大鼠直肠黏膜层变薄,平滑肌萎缩;肺脏表现有间质性炎症,局部可见肺泡扩张,肺出血,肺泡壁破裂,肺气肿样改变,周边肺泡塌陷、不张;其他脏器未见明显病变;肺泡灌洗液中淋巴细胞数量增多。大承气汤治疗后上述变化明显减轻。持续结扎组病变较解扎组更为明显。结论肠道病变可引起特异性的肺脏损害;治疗肠道病变,肺脏损害亦随之减轻,从一个侧面印证了中医"肺合大肠"脏腑相关理论,肺-肠病理生理存在一定的相关性及互动调节现象。     

动物模型在经方研究中的应用

中医动物模型的建立在经方研究中发挥着重要作用。文章介绍了慢性阻塞性肺病模型、卵清蛋白致敏支气管哮喘小鼠模型、大鼠直肠半结扎模型、胃溃疡大鼠模型、大鼠胃电节律失常模型在经方研究中的应用。从造模方法、体会及经方研究三方面进行介绍。     

基于微量量热法的寒热中药对大肠杆菌生长热谱曲线的影响

目的：观察典型寒热中药黄连、制附子对大肠杆菌生长代谢作用的影响,探讨微量量热法用于中药寒热差异及量化研究的可行性。方法采用微量量热技术,测定大肠杆菌在不同浓度寒热中药水煎液干预下的生长热谱曲线,分析其热力学参数。结果黄连、制附子均可影响大肠杆菌产热效应,其效应影响与药物浓度具有正相关关系;黄连组的热焓值明显低于对照组,制附子组的热焓值明显高于对照组。结论微量量热技术是从生物体生命周期及能量代谢角度,观察中药寒热效应差异的客观化手段之一。     

针刺百会、大椎穴对帕金森病小鼠脑线粒体复合物活性的影响

目的 探讨针刺对帕金森病(PD)小鼠脑线粒体功能的保护作用.方法 C57BL/6雄性小鼠随机分为5组:正常组、模型组、针刺组、美多巴组、针刺结合美多巴组(简称针美组).首先腹腔注射1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立帕金森病模型,后3组造模后采取不同的治疗措施,动物分别存活14 d和28 d,取脑,应用蔗糖差数离心法分离提取、溶解脑线粒体.采用考马斯亮蓝G250染色法进行其蛋白定量,运用生化比色法检测小鼠脑线粒体复合物I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性.结果 14 d时,模型组小鼠脑线粒体复合物I活性下降(P＜0.05),针刺组线粒体复合物Ⅱ比模型组活性显著升高(P＜0.05),美多巴组的线粒体复合物Ⅱ活性较针刺组明显降低(P＜0.05).28 d时,模型组线粒体复合物Ⅳ活性显著下降(P＜0.05),针刺组和针美组线粒体复合物Ⅳ活性较模型组显著升高(P＜0.05),而美多巴组对复合物IV的活性无明显影响(P＞0.05).结论 针刺百会、大椎穴和加灌胃美多巴可在一定程度上抑制PD小鼠脑线粒体复合物活性的下降,保护脑线粒体的功能.     

新清开灵干预脑出血后急性期ERK1/2、c-fos、c-jun的实验研究

目的:观察大鼠脑出血后血肿周围组织48 h、72 h后ERK1/2、c-fos、c-jun的表达,探讨新清开灵注射液干预大鼠脑出血后MMP-9表达从而抑制血肿周围脑水肿的作用途径。方法:采用尾状核注射胶原酶的方法复制大鼠脑出血的动物模型,并给予新清开灵注射液进行干预,Western blot方法对脑组织ERK1/2、c-fos、c-jun进行检测。结果:脑出血后模型组c-jun各时间点表达水平均升高,72 h达到高峰,皆有统计学意义(P<0.01)。与脑出血48 h模型组相比较,同一时间点新清开灵小剂量组血肿周围脑组织c-jun表达减少,在统计学上有显著性差异(P<0.01)。与脑出血模型72 h组比较,同一时间点新清开灵小剂量组血肿周围脑组织c-jun表达减少,具有统计学意义(P<0.05),大剂量组血肿周围脑组织中c-jun表达亦减少,在统计学上有显著性差异(P<0.01)。脑出血模型组ERK1/2、c-fos各时间点表达水平均升高,48 h达高峰,但均无统计学意义(P>0.05)。与同一时间点模型组相比较,新清开灵小剂量组、大剂量组血肿周围脑组织ERK1/2、c-fos表达均降低,但在统计学上均无差异(P>0.05)。结论:通过抑制c-jun干预MMP-9表达是新清开灵注射液干预脑出血后MMP-9表达,并以进一步减轻脑水肿的可能途径。     

比较电针"合谷""足三里"穴对IBS模型大鼠结肠动力及结肠M3受体表达的影响

目的观察并比较电针"合谷""足三里"穴对肠易激综合征(IBS)模型大鼠结肠动力及结肠M_3受体免疫反应物阳性表达的影响,初步探讨电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS的效应差异及结肠动力改变的相关机制。方法选取新生wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、模型对照组、合谷组和足三里组。除空白对照组外,均采用新生期母婴分离、醋酸灌肠及结直肠扩张刺激(CRD)的方法联合制备IBS大鼠模型。大鼠9周龄时,合谷组和足三里组分别给予电针(EA)干预,隔日1次,共5次。空白对照组及模型对照组不予干预。治疗结束后,按照Bristol大便分类法观察电针前后IBS大鼠的便型,采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行肠道敏感性及平滑肌收缩强度评估,观察潜伏期、收缩波个数、起始波压力值;采用免疫组织化学法检测结肠M_3受体的表达。结果与针前相比,针后合谷组及足三里组大鼠的大便评分显著降低(P0.01)。与空白对照组相比,模型对照组大鼠的大便评分显著增高(P0.01),潜伏期明显缩短(P0.01),收缩波个数明显增多(P0.01),起始波压力值明显降低(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平明显增强(P0.01);合谷组结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平增强(P0.05)。与模型对照组相比,合谷组和足三里组大鼠针后的大便评分均显著降低(P0.01),潜伏期均明显延长(P0.01),合谷组和足三里组收缩波个数明显减少(P0.01,P0.05),起始波压力值均明显增高(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平明显下降(P0.01)。与合谷组相比,足三里组大鼠的大便评分降低(P0.05),起始波压力值显著降低(P0.01),结肠内M_3受体免疫反应物阳性表达水平下降(P0.05)。结论电针"合谷""足三里"穴均可抑制IBS模型大鼠肠道收缩,改善肠道敏感性,缓解IBS症状。但"合谷"穴缓解腹痛效果更佳,而"足三里"穴减轻腹泻作用更强。说明电针不同穴性及不同神经节段支配的穴位对IBS疗效具有经穴效应特异性。     

大补阴丸、牵正散及合方对帕金森小鼠脑线粒体酶复合物活性作用的实验研究

目的：探讨大补阴丸、牵正散及合方对MPTP诱导帕金森小鼠脑线粒体酶复合物活性的影响。方法：采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）建立帕金森病模型。C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、大补阴丸组、牵正散组和合方组。各组动物于开始造模后14d和56d后处死取脑,测定脑内线粒体酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性。结果：造模14d后,与正常组比较,模型组小鼠脑复合酶I活性有显著降低;牵正散组小鼠脑复合酶I活性较模型组有显著提高。造模56d后,模型组小鼠脑复合酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性较正常组小鼠均有显著降低;相比模型组,合方给药能明显改善小鼠脑复合酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性,大补阴丸能改善复合酶Ⅱ、Ⅳ的活性。结论：大补阴丸、牵正散及合方能保护帕金森小鼠脑线粒体复合酶的活性,进而对维持正常线粒体功能发挥作用。