芳樟醇调控Nrf2/HO-1抑制黄曲霉毒素B1所致肝损伤的实验

目的 探讨芳樟醇对黄曲霉毒素B₁（AFB₁）诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制。方法 20只雄性SPF级SD大鼠,采用随机数字表法分为3组：正常组（n=6）,AFB₁组（n=7）,芳樟醇组（n=7）。预防性给予芳樟醇溶液（200 mg·kg^-1）持续14 d,正常组和AFB1组给予等体积双蒸水灌胃。芳樟醇预防性给药结束后,连续2 d腹腔注射AFB₁（1 mg·kg^-1,溶于生理盐水）溶液,以建立大鼠急性肝损伤模型。模型建立14 d后进行样本采集和处理。苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察大鼠肝组织病理学改变;生化检测各组大鼠的丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）和间接胆红素（IBil）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和肝组织中的Fe³⁺和Fe²⁺含量;蛋白免疫印迹法（Wester blot）检测核转录因子红系2相关因子2（Nrf2）和血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的表达水平;分子对接技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白之间的结合性能;分子动力学技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白结合能的稳定性和亲和力。结果 病理结果表明,与AFB1组比较,芳樟醇组肝脏结构趋向正常,蓝色胶原纤维显著减少;芳樟醇组的ALT、AST、GGT、LDH含量及ALP、TBil、DBil、IBil水平均显著降低（P<0.01）,肝组织中的Fe³⁺和Fe²⁺含量及氧化应激产物MDA的水平显著降低（P<0.01）;抗氧化物质SOD水平、CAT含量和GSH含量则显著增加（P<0.01）;分子对接结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1靶点结合的分子对接能分别为-5.495 6、-5.199 4 kcal·mol^-1（1 cal≈4.186 J）;分子动力学结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1结合能与亲和力较强。Western blot结果显示芳樟醇组中Nrf2蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）,而HO-1蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）。结论 芳樟醇可能通过调控铁死亡信号通路中的Nrf2/HO-1来抑制肝脏细胞铁死亡并调节肝脏氧化应激水平,从而实现对AFB₁诱导的急性肝损伤的保护作用。     

基于P糖蛋白研究仙茅对顺铂耐药非小细胞肺癌细胞的增敏机制

目的：探究中药仙茅水煎液及其主要入血成分苔黑酚葡萄糖苷(OG)对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药细胞(A549/cis)耐药性的影响及其潜在机制。方法：用AutoDock Vina分子对接软件评估P糖蛋白(P-gp)与OG的结合能力;CCK-8法检测顺铂、仙茅水煎液、OG及其联用对A549/cis细胞活力的抑制率;蛋白质免疫印迹法检测A549/cis中P-gp的表达水平。结果：P-gp与OG模拟分子对接的结合自由能为-7.6 kcal/mol(1 cal=4.184 J),二者具有良好的结合活性;顺铂对A549/cis的半抑制浓度(IC₅₀)约为5.5μg/mL,仙茅水煎液与OG在梯度浓度下对A549/cis活力均无明显影响;顺铂低剂量(1.5μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高剂量(5×10^-5mol/L)联用组、顺铂中剂量(4μg/mL)与仙茅水煎液高、低剂量(1 000μg/mL、500μg/mL)或OG高、低剂量(5×10^-5mol/L、1×10^-5