5-LOX-CysLTs-CysLTsR表达规律及黄芩苷-栀子苷配伍对大鼠脑缺血抗炎作用机制研究

目的动态观察脑卒中大鼠脑组织半胱氨酰白三烯(CysLTs)活性及其5-脂氧酶(5-LOX)、半胱氨酰白三烯受体1(CysLTs1)、半胱氨酰白三烯受体2(CysLTs2)表达水平变化规律,探讨黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍抗脑缺血炎性损伤机制。方法线栓法制备大脑中动脉堵塞模拟脑缺血模型,模型成功后随机分为空白对照组(Control)、模型组(pMCAO)、黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组、齐留通45mg/kg组、孟鲁司特0.5mg/kg组,持续35d给药治疗,每隔7d,神经功能评分观察神经保护作用,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测脑组织CysLTs含量;蛋白质印迹(Western Blot)法检测脑组织5-LOX、CysLTs1、CysLTs2蛋白表达水平。结果与模型组相比,黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组在脑缺血28d内可显著降低了CysLTs水平;Western Blot结果显示,5-LOX、CysLTs1和CysLTs2蛋白表达明显降低;至恢复期35d,各蛋白表达水平已无显著性差异。结论黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍可减轻MCAO大鼠的神经功能障碍,其作用机制可能与抑制5-LOX活性、降低CysLTs1和CysLTs2蛋白表达有关。     

黄芩苷、栀子苷及其配伍对小胶质细胞增殖及激活后炎性因子影响

目的研究黄芩苷(BC)、栀子苷(GD)及其配伍对小胶质细胞增殖及对细胞激活后释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法 MTT检测BC、GD及其配伍对小胶质细胞激活损伤后增殖影响;Griess法检测其对小胶质细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;Elisa检测其对抗炎因子TGF-β、IL-10,促炎因子TNF-α、IL-1β的表达。结果 BC、GD及其配伍提升脂多糖刺激后BV2细胞存活率,减少NO分泌,减少细胞IL-lβ、TNF-a的表达;GD增加IL-10释放;BC提高TGF-β的表达;配伍组提高IL-10及TGF-β的水平。结论 BC、GD及其配伍提高小胶质细胞激活损伤后的存活率,升高IL-10、TGF-β的表达,降低IL-1β、TNF-α的表达从而减少细胞损伤。     

基于网络药理学的黄芩素、京尼平抗脑缺血作用机制研究

目的采用网络药理学及分子对接技术,以灯盏花乙素苷元(scutellarein,SE)作为参照,预测黄芩素(baicalein,BE)、京尼平(genipin,GE)抗脑缺血作用靶点,为脑缺血疾病的临床防治和开发研究提供参考。方法利用TCMSP、Swiss Target Prediction和Stitch数据库检索和文献挖掘方法,预测SE、BE、GE作用靶点,同时应用DisGeNET、CTD、NCBI Gene、OMIM、DrugBank和PharmGkb数据库预测脑缺血疾病相关靶点。通过Cytoscape 3.3.0构建小分子-靶点网络图,用DAVID软件分析SE、BE、GE特有抗脑缺血靶点的GO功能富集和KEGG通路分析。采用AutodockVina软件对SE、BE、GE与抗脑缺血共同靶点分别进行对接研究,根据受体与配体的结合能和抑制浓度排序,选择最佳的靶点蛋白。结果 SE、BE、GE分别预测出30、59、35个靶蛋白,SE与BE共同抗脑缺血疾病靶点有PIK3CG、CYP1A2、VEGFA、ALOX5、PTGS2,SE与GE共同抗脑缺血靶点为PTGS2。分子对接结果显示受体PTGS2与SE、BE、GE对接结合能及抑制浓度相对较低。GO功能富集结果显示BE-SE共同靶点主要分布于细胞质、细胞器膜、内质网膜等部位,具有与金属离子、阳离子结合功能及催化、氧化还原酶活性,参与细胞脂质、羧酸、含氧酸、有机酸代谢及脂肪酸合成等过程有关;KEGG分析结果显示受体PTGS2主要作用于花生四烯酸代谢通路和VEGF信号通路,BE与GE配伍治疗脑缺血疾病通过抑制PTGS2(COX-2)和VEGF蛋白的表达,从而减轻炎症因子造成的脑组织损伤并改善血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)的通透性发挥脑保护作用。结论预测了BE与GE配伍治疗脑缺血疾病的潜在靶点,初步验证了治疗脑缺血疾病的作用机制,为进一步深入研究BE与GE配伍治疗脑缺血作用机制提供参考,也为下一步合成新的衍生物提供基础。     

基于网络药理学的四逆汤抗心肌缺血损伤的分子机制研究

目的:运用网络药理学方法预测分析四逆汤抗心肌缺血作用机制和配伍规律。方法:采用TCMSP、TCMID、TCM-PTD数据库以及文献挖掘的方法收集四逆汤的活性化合物,利用DRAR-CPI服务器预测活性化合物的靶点,同时应用DisGeNET和CTD数据库收集抗心肌缺血损伤药物作用靶点,然后将两种方法收集到的靶点进行比对分析,筛选出四逆汤抗心肌缺血的作用靶点,分别利用MAS 3.0和Cytoscape 3.3.0软件对筛选出的靶点进行GO富集、KEGG分析和构建四逆汤药物分子-靶点-通路网络图。结果:共预测出91个四逆汤抗心肌缺血的共同作用靶点和120条信号通路,其中23条信号通路直接或间接与心肌缺血有关。结论:四逆汤主要通过调控补体系统、细胞因子及MAPK信号通路等途径发挥拮抗减毒和协同增效作用,推测其可能通过参与调节细胞凋亡和炎症反应、增强心肌功能等发挥抗心肌缺血的作用。