基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系

目的以手参茎尖为外植体,研究手参体细胞胚胎发生体系。方法应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果手参茎尖胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,诱导率为98%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L,体胚萌发率为100%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养50 d后全部发育成完整植株。结论对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。     

基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系

目的 以手参茎尖为外植体，研究手参体细胞胚胎发生体系。 方法 应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。 结果 手参茎尖胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为：CM+6 BA 1.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+2,4 D 0.1 mg/L，诱导率为98%；体胚发育及植株再生最适宜的培养基为：CM+6 BA 1.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L，体胚萌发率为100%，萌发的体胚在发育培养基上继续培养50 d后全部发育成完整植株。 结论 对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。     

老鹳草及其不同溶剂萃取物的红外光谱分析与鉴定

目的 对老鹳草Geranium wilfordii及70%丙酮提取不同溶剂萃取物的主体成分、特定成分进行快速的分析与鉴定。方法 采用红外光谱、二阶导数光谱结合二维相关红外光谱对老鹳草及其70%丙酮提取不同溶剂萃取物进行分析鉴定。结果 红外宏观指纹分析结果发现老鹳草原药材含有1730、1618～1445、1337 cm^-1等特征谱线,主要归属于老鹳草素及其衍生物的鞣质类化合物的特征吸收。通过分析不同极性萃取物,可以快速获知老鹳草素及其衍生物的富集情况和发现亚硝酸钾的前体硝酸钾的存在和分布情况。光谱分析结果表明,醋酸乙酯层、正丁醇层萃取物与老鹳草素相关系数分别为0.944 3、0.930 2,验证大量老鹳草素及其衍生物的存在,及其主要集中在该两层;在氯仿层、醋酸乙酯层和水层提取物中有硝酸钾特征吸收峰,以水层最明显。结论 红外光谱不仅可以对主要有机成分（鞣质、黄酮和多糖类等）进行检测分析,同时可对硝酸钾为代表的无机盐进行快速检测,在中药质量与安全的分析评估中其有广阔的应用前景。     

基于指纹图谱结合一测多评法评价不同产地牻牛儿苗质量

目的 建立牻牛儿苗Erodium stephanianum的指纹图谱,并同时建立其中4个酚酸类成分含量的一测多评分析（quantitative analysis of multi-components by singlemarker,QAMS）方法,以期对牻牛儿苗药材进行整体质量控制。方法 以没食子酸为参照峰确定共有峰,建立牻牛儿苗的高效液相色谱指纹图谱;以没食子酸为内标,确定柯里拉京、老鹳草素和鞣花酸的相对校正因子并计算含量,实现一测多评。同时采用外标法测定4个成分的含量,比较计算值和实测值的差异。结果 建立了牻牛儿苗的HPLC指纹图谱,10批样品相似度均在0.891以上;以没食子酸为内标建立的柯里拉京、老鹳草素和鞣花酸的相对校正因子分别为0.751、0.214和0.444,重现性良好,10批牻牛儿苗样品QAMS法计算值与实测值无显著差异。结论 所建立的指纹图谱结合QAMS简便可行,可为牻牛儿苗药材整体质量控制提供参考和依据。     

脂质体介导人端粒酶逆转录酶基因构建永生化软骨细胞方法的建立及评价

目的：探索将人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因转入兔软骨细胞以获取大量种子细胞的方法和技术。方法：分离培养原代兔软骨细胞,以pcDNA3.1/Zeo(+)-hTERT载体进行基因转染,对照组则为空载体pcDNA3.1/Zeo(+),筛选并挑选出阳性克隆后扩增,以逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测转染hTERT基因后的软骨细胞hTERT mRNA表达;甲苯胺蓝染色判断转染hTERT基因后的软骨细胞是否具有软骨细胞的生物学特性;流式细胞术检测细胞周期及核型;裸鼠致瘤实验观察成瘤情况。结果:RT-PCR检测RNA水平上hTERT在细胞中的表达情况,hTERT转入兔软骨细胞后细胞形态未发生变化,长满单层后仍然呈现出多角形,与正常体外培养的软骨细胞形态基本一致。甲苯胺蓝染色后可见多糖染成蓝紫色,呈现较小蓝紫色颗粒,蛋白多糖等基质分布均匀,即转染hTERT基因后的软骨细胞具有合成和分泌软骨相关基质的功能。细胞周期测定转染hTERT的兔软骨细胞的增殖能力明显上升,细胞分裂基本以整数二倍体方式进行,保持了核型的基本稳定。裸鼠接种不致瘤。结论：转染hTERT的软骨细胞表型未发生转化,具有作为种子细胞和研究正常软骨细胞的生理、生化工具细胞的可行性。