流动条件下血栓通胶囊抗血小板黏附的分子药理学机制研究

研究流动条件下血栓通胶囊(XST)抗血小板黏附的效应及其可能的作用机制。利用Bio Flux 1000控剪应力微流培养系统模拟体内流动条件,建立TNF-α诱导的血管内皮细胞损伤模型,动态实时观察XST(0.3 g·L-1)对血小板黏附于受损血管内皮细胞表面的影响。以Western blotting法测定血管内皮细胞VCAM-1的表达,以放射免疫法检测6-keto-PGF1α,TXB2的分泌。结果显示,生理和病理流动条件下XST均可抑制血小板黏附,抑制率分别为15.0%,34.1%;在病理低剪应力或静态条件下,XST能够明显抑制血管内皮细胞VCAM-1的表达和TXB2释放(P0.05)。该研究从血流/血管/血液相互作用的角度发现,XST可能通过内皮细胞保护途径,抑制血小板黏附,进而发挥其抗血栓形成的效应。在不同流动条件下,XST抗血小板黏附的效应有所不同,病理低剪应力更有利于XST药效的发挥。     

三七总皂苷心脑血管药理作用及其溶血反应

三七总皂苷(total saponins of Panax notognseng,PNS)对于心脑血管疾病具有明确的治疗效应和广泛的应用前景,同时皂苷所具有溶血特性与其分子结构类型及用药剂量有关。该文一方面总结了近5年来PNS在心脑血管药理方面的研究进展;从整体、器官、细胞、分子水平的多项研究表明,PNS具有改善心肌缺血、抗血栓、抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化、调节血管内皮细胞功能、改善脑缺血损伤等方面的作用。另一方面,通过对PNS以及单体皂苷溶血反应的结构特点、剂量以及检测方法等方面进行文献综述,发现PNS的溶血作用与其分子结构类型及用药剂量密切相关。三七皂苷的结构不同,溶血活性不同,构效关系提示,原人参二醇C-20上糖侧链的长度以及C-3上二糖的连接方式可能影响皂苷的溶血活性。PNS在一定剂量范围内(2.5~250 mg·L-1)无溶血活性,在高浓度(≥500 mg·L-1)时表现出溶血特性。因此,根据三七皂苷单体溶血与抗溶血作用的特点及量效关系,通过控制PNS中具有溶血活性的皂苷单体比例,并通过改进溶血检测方法,可以为三七皂苷制剂临床合理应用提供保障。     

基于抑制血小板聚集活性检测的血栓通胶囊质量控制研究

通过建立血栓通胶囊(XST)体外抑制血小板聚集的生物活性测定法用于补充其质量控制方法。以体外抑制大鼠血小板聚集作用来考察血栓通胶囊的生物活性。以三七总皂苷、注射用血塞通冻干粉作为标准对照物质进行效价测定。研究结果发现血栓通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集具有显著抑制作用,并且呈现出剂量依赖关系。注射用血塞通冻干粉比三七总皂苷对照品体外抗血小板活性更稳定,适宜作为标准对照物质。采用"量反应平行线"法作为血栓通胶囊体外抗凝血酶诱导血小板聚集的生物效价检测方法,重复性较好(RSD 2.9%),样品检测结果均能通过可靠检验(偏离直线P>0.05,偏离平行P>0.05)。该研究建立的生物效价检测方法可以作为血栓通胶囊生物评价的质控方法之一。     

浊度法测量血小板聚集的变异分析及其在药效评价中的应用

目的：考察浊度法测量血小板聚集指标的稳定性及其在药效评价中的应用。方法采用北京泰利康信血小板聚集仪（LBY-NJ4）检测不同诱导剂诱导血小板聚集参数的变异系数（CV）,评价阿司匹林和三七总皂苷抑制血小板聚集的效应及其稳定性。结果在二磷酸腺苷（ADP）和胶原诱导剂作用下,血小板最大聚集率、达峰速率和聚集曲线下面积的变异系数均分别小于4%、4%和7%。凝血酶作用下的聚集达峰速率变异系数偏大为24.45%。排除纤维蛋白的影响,选择洗涤血小板观察凝血酶诱导聚集作用,达峰速率的变异幅度降低至4.42%。三七总皂苷以剂量依赖方式抑制血小板聚集,3项聚集参数的CV值在1.58%～12.34%之间,与阿司匹林相比表现出较好的稳定性。结论利用浊度法测量血小板聚集,3项聚集参数稳定性较好;并利用多种参数评价药物抑制血小板聚集的效应及其稳定性,可以更好地发现活血化瘀中药的作用特点。     

基于抑制单核巨噬细胞增殖活性检测的注射用骨肽质量控制

目的:通过建立注射用骨肽抑制单核巨噬细胞(THP-1)增殖的生物活性测定法,以补充完善其质量控制方法。方法:采用CCK-8法以体外抑制THP-1增殖作用来考察注射用骨肽的生物活性。以A01160410批次注射用骨肽作为对照物质进行效价测定。结果:注射用骨肽对THP-1的增殖具有一定的抑制作用。采用量反应平行线(2·2)法作为注射用骨肽抑制THP-1增殖的生物效价检测方法,重复性较好,样品检测结果均能通过可靠性检验(回归P0.01,偏离平行P0.05)。A20160102批次注射用骨肽效价94.50 U·m L-1,可信限率(FL)=6.14%,可信限范围为88.87~100.47 U·m L-1;A01160401批次注射用骨肽效价为92.04 U·m L-1,FL=4.36%,可信限范围为88.12~96.15 U·m L-1;A01160406批次注射用骨肽效价为83.25 U·m L-1,FL=8.52%,可信限范围为76.46~90.65 U·m L-1。3个批次注射用骨肽实验结果合并分析结果显示,注射用骨肽抑制THP-1的效价为90.37 U·m L-1,FL=8.63%,可信限范围为82.91~98.51 U·m L-1。不同操作人员对注射用骨肽的效价测定结果没有明显差别,具有良好的可重复性。结论:该研究建立的生物效价检测方法可以补充作为注射用骨肽生物评价的质控方法之一。