Sox9、siRNA表达载体的构建与鉴定

目的构建Sox9 siRNA表达载体，分析Sox9在软骨肉瘤中的作用机制。方法根据Kou Ⅰ，IkegawaS提椟的Sox9 mRNA序列，设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中，并对重组质粒（命名为pSilencer／Sox9 siRNA）进行酶切及测序鉴定。结果双酶切证实Sox9 siRNA表达载体克隆构建成功，插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建Sox9 siRNA表达载体。     

遵义市11420名孕产妇梅毒检测结果分析

目的:了解遵义市孕产妇梅毒感染情况.方法:收集四家医院住院分娩及孕产妇健卡梅毒血清学检测等资料进行分析.结果:11420名孕产妇阳性为80例,梅毒检测率0.71％,感染较为严重,应加强孕产妇的梅毒监测和传播.     

唑来膦酸对软骨肉瘤细胞生长的影响

目的研究探讨第三代双磷酸盐类药物唑来膦酸（ZOL）在体外对人软骨肉瘤细胞株SW1353增殖厦凋亡的影响，进一步研究COL与甲氨喋呤（MTX）对细胞的生长抑制是否具有协同作用。方法应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法，检测和观察分别及联合应用不同浓度ZOL和MTX对SW1353的增殖抑制和诱导凋亡的作用。结果ZOL对SW1353细胞的抑制效应与药物剂量及作用时间均呈正相关；与MTX联合用药，作用明显强于单独用药组，抑制率59．22％（P〈0．05），凋亡率28．47％（P〈0．05）。结论ZOL对软骨肉瘤SW1353细胞株有生长抑制作用，呈时间、剂量依赖性效应，与MTX联合用药抑制作用更强，有协同作用。     

软骨肉瘤细胞Caspase-3表达及其与相关基因相互作用的研究

目的:研究肿瘤基因Caspase-3与PTHrP和Sox9在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA分别阻断PTHrP和Sox9后,检测肿瘤细胞中Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,Caspase-3的mRNA表达增加了57.7%,蛋白的表达增加了57.1%;Sox9基因被干扰之后,Caspase-3的mRNA表达增加了47.4%,蛋白的表达增加了48.2%。结论:肿瘤基因Caspase-3在软骨肉瘤细胞中的表达与软骨肉瘤相关基因PTHrP和Sox9有关,可能是位于PTHrP和Sox9的下游基因。     

软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨内瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响.方法设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化.以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况.结果Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.被转染的HTB-94 Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146 0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029.其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%.结论经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制.肿瘤细胞的凋亡明显增加.     

超高分子聚乙烯颗粒对体外培养成骨细胞活性的影响

目的 建立小鼠胚胎成骨细胞和超高分子聚乙烯(UHMWPE)颗粒的体外联合培养的新模型,初步研究超高分子聚乙烯颗粒对成骨细胞活性和核心结合因子α1(Cbfctl)表达的影响.方法 分为空白对照组和UH-MWPE颗粒干预组,2组常规培养小鼠胚胎成骨细胞,待细胞贴壁后装满培养基,UHMWPE颗粒干预组加入UH-MWPE颗粒,封闭倒置培养瓶,颗粒漂浮至贴壁细胞层.应用流式细胞技术分析各组细胞早期凋亡情况.分别在共培养的第3、5、7天检测细胞Cbfα1在mRNA和蛋白水平上的表达情况.结果 封闭条件下小鼠胚胎成骨细胞正常生长可达10天;UHMWPE颗粒不影响细胞增殖活性,对细胞无明显毒性作用;UHMWPE颗粒干预组的目的 基因Cbfα1表达增强.结论 超高分子聚乙烯颗粒可以独立、直接影响成骨细胞相关因子的分泌.     

超高分子聚乙烯颗粒对成骨细胞基因表达的影响

目的 探讨超高分子聚乙烯(UHMWPE)颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其受体骨保护素(OPG)基因表达的影响.方法 实验分为空白对照组和UHMWPE颗粒干预组,分别在培养的第3、5、7天时利用RT-PCR和Western blotting法观察成骨细胞两种目的基因(OPG、 RANKL)的mRNA表达和蛋白表达强度变化.结果 UHMWPE颗粒呈剂量依赖性上调成骨细胞OPG和RANKL表达,RANKL/OPG比率随着UHMWPE颗粒刺激的剂量增加和时间延长而增高.结论 UHMWPE颗粒通过调节成骨细胞对RANKL、OPG两者的分泌间接地调节破骨细胞活性,从而影响骨代谢,这可能是UHMWPE颗粒引起人工关节假体松动的重要机制之一.     

依创面立体定形游离皮瓣的临床应用

目的：探讨应用游离皮瓣修复软组织缺损的方法及效果。方法：选择24例需要行游离皮瓣修复创面的患者,根据其软组织的不同缺损情况,取无菌棉布片制作与创面相同形状的模板,切下皮瓣后依据创面的形状及深度修剪掉皮瓣多余的脂肪组织,保留皮瓣的营养血管网,制备成立体的定形皮瓣填补创面缺损。皮瓣切取面积最小1．5cm×2．5cm,最大12cm×24cm,供区直接缝合或中厚皮片修复。结果：术后皮瓣全部成活,创面修复后表面平坦,术后随访13例,随访时间3-36个月,皮瓣颜色、质地和厚薄与受区相近,外形、功能恢复满意。皮瓣感觉恢复至S2-S4。结论：立体定形皮瓣兼顾了受区外形与功能的修复,是创面美容修复的理想方法。     

软骨肉瘤细胞PTHrP和Sox9及Bcl-2基因表达及其相互作用的研究

目的：研究PTHrP、Sox9和Bcl-2基因在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法：小干扰siRNA阻断PTHrP后,分别检测肿瘤细胞中Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达。结果：PTHrP基因被干扰后,PTHrP基因的mRNA及蛋白表达降低,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达都受到抑制;而PTHrP基因的干扰作用去除,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达抑制作用也消失。结论：PTHrP基因在肿瘤细胞的抑制引起Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的抑制,提示PTHrP基因是Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的上游基因。     

断指再植术后患者血清丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性变化

目的 探讨断指再植患者术后血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性变化特点.方法 对40例患者分别于手术后1、24、48、72 h,第7、14 d检测血清MDA含量和SOD活性,另外取30例健康成年人检测血清MDA含量和SOD活性作为对照组进行对比分析.结果 断指再植患者术后1h至7d血清MDA含量逐渐升高,血清SOD活性明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),术后14 d血清中MDA及SOD基本达到对照组水平(P＞0.05).结论 术后检测MDA含量及SOD活性的变化可以指导临床用药,有效地防治血管危象的发生.