基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响

目的 通过观察加味升降散对免疫球蛋白（Ig）A肾病大鼠血清及肾组织中微小RNA-148b（miRNA-148b）、白细胞介素-6（IL-6）、核心1β1,3-半乳糖基转移酶（C1GALT1）、分子伴侣Cosmc（core1β3-Gal-T特异性分子伴侣,C1GALT1C1）、半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）表达的影响探讨其可能作用机制,为临床运用加味升降散治疗IgA肾病提供科学依据。方法 将42只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组8只、造模组34只,将大鼠适应性饲养1周后采用联合牛血清白蛋白（BSA）灌胃+尾静脉注射脂多糖（LPS）+皮下注射四氯化碳（CCl₄）、蓖麻油的免疫复合的方法建立实验性IgA肾病大鼠模型。造模完成后随机选取2只大鼠取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量（加味升降散,6.27 g·kg^-1）组、中药高剂量（加味升降散,12.54 g·kg^-1）组、贝那普利（10 mg·kg^-1）组各8只,进行药物灌胃,1次/d,治疗4周。于实验第1周末、第9周末、第13周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）,第14周各组大鼠麻醉后取材,股动脉取血后离心取上清检测白蛋白（ALB）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检IL-6、Gd-IgA1表达水平变化;苏木素-伊红（HE）/马松（Masson）/碘酸六胺银（PASM）法观察肾组织病理改变;透射电镜观察肾小球超微结构变化;免疫组化法观察IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1表达情况;免疫荧光观察肾小球系膜区;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察miRNA-148b、IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1蛋白水平变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平明显升高（P<0.05）,ALB含量水平明显降低（P<0.05）;肾小球系膜细胞增生、系膜区增厚、足细胞足突融合,大量颗粒状IgA免疫复合物沉积于肾小球系膜区;IL-6在系膜区、足细胞表达增强,C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达减弱;IL-6 mRNA、miRNA-148b表达增强（P<0.01）,C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达减弱（P<0.01）;IL-6蛋白表达显著增强（P<0.01）,C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达显著减弱,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,加味升降散干预后,24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,ALB含量水平升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;病理损害减轻;基底膜IgA免疫复合物沉积明显减少;IL-6在大鼠肾小球系膜区、足细胞的表达减弱,C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达增强;IL-6 mRNA、miRNA-148b表达减少（P<0.01）,C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达增加（P<0.01）;IL-6蛋白表达明显减弱（P<0.05,P<0.01）,C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达增强,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味升降散可能通过降低IgA肾病大鼠血清及肾组织中miRNA-148b、IL-6表达,使C1GALT1、C1GALT1C1表达恢复,减少Gd-IgA1的生成,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,发挥保护肾脏的作用,达到延缓疾病进展的目的,并且随剂量增加效果增强。     

桑苏二陈汤加味联合乙酰半胱氨酸泡腾片对特发性肺间质纤维化肺功能的影响

目的 观察桑苏二陈汤加味联合乙酰半胱氨酸泡腾片对特发性肺间质纤维化肺功能的影响及有效性和安全性.方法 选择60例中医辨证为肺肾气虚、痰瘀阻络型的特发性肺间质纤维化患者,随机分为对照组和观察组,各30例.对照组采用乙酰半胱氨酸泡腾片及按需氧疗治疗,观察组在西医治疗基础上加用桑苏二陈汤加味治疗.2组均持续治疗3个月.治疗结束后比较2组治疗前后主要临床症状评分及中医证候积分的变化情况、6分钟步行实验、肺功能、相关血气分析、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素-6(IL-6)指标及胸部HRCT评估.结果 观察组治疗总有效率(86.67％,26/30)高于对照组(63.33％,19/30);观察组肺功能情况、6分钟步行实验的结果、血气分析、转化生长因子β1(TGF-β1)指标均优于对照组;与对照组相比,观察组中医症状积分较低.结论 桑苏二陈汤加味联合乙酰半胱氨酸泡腾片可以有效减轻特发性肺间质纤维化肺功能患者的临床症状,改善肺功能,缓解呼吸困难程度,增加6分钟步行距离,延缓疾病进展,临床疗效好且安全性较高.     

苏奎国教授治疗肺间质纤维化经验

苏奎国教授认为肺间质纤维化是本虚标实、虚实夹杂之证;基本病机是肺气失宣、肺肾亏虚、痰瘀互结、热毒内壅;临床采用中西医结合分期(急性期、牵延期)论治,以益气固本为主,根据不同分期采用疏风宣肺、补益肺肾、化痰祛瘀散结、清热解毒等法,同时顾护脾胃、调肝,并应用桑苏二陈汤加减以及现代药理研究有明确抗肺间质纤维化的药物进行治疗.     

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察加味真武汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅳ型胶原蛋白（COL-Ⅳ）的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量（7.2 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤中剂量（14.4 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤高剂量（28.8 g·kg^-1·d^-1）组、盐酸贝那普利（10 mg·kg^-1·d^-1）组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-Ⅳ mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高（P<0.01）;血清IL-6含量显著上升（P<0.01）;大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著升高（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.05）;肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低（P<0.01）;血清IL-6含量显著下降（P<0.01）;大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平明显升高（P<0.05）;肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著上升（P<0.01）。结论 加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。     

基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机制

目的 通过观察腺嘌呤灌胃不同时间对模型大鼠一般生命体征、生化指标、心肾组织结构及功能的影响,探讨腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭（CRF）并发心血管病变大鼠模型的制备方法。方法 模型组大鼠腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃16周,正常组大鼠给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。于第5、13、17周检测模型组及正常组大鼠24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）、生化指标、心脏超声,心肾组织结构及功能变化;于第5周、13周检测模型组及正常组大鼠血压;每周记录大鼠体质量变化;每日观察大鼠一般情况。结果 ①与正常组大鼠比较,模型组大鼠体质量明显减少（P<0.05）;②与正常组大鼠比较,模型组大鼠尿量明显增多,13周时出现蛋白尿;③与正常组大鼠比较,模型组大鼠第5周开始甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、血钾、血磷差异具有统计学意义（P<0.05）,第17周时尿酸明显升高（P<0.05）;血钙降低（P<0.01）;④与正常组大鼠比较,模型组大鼠第5周出现血压明显升高（P<0.05）,并逐渐加重;⑤与正常组大鼠比较,模型组大鼠第5周左心室室壁厚度差异无统计学意义,第13周差异有统计学意义（P<0.05）;⑥与正常组大鼠比较,模型组大鼠第5周肾脏出现纤维化,纤维化程度不断加重,第13周心血管周围出现明显纤维化;⑦与正常组大鼠比较,模型组大鼠近端小管上皮细胞内可见高密度菱形针状结晶不断增多,细胞膜完整性受损,细胞间距不断增加,溶酶体不断增多,线粒体增生、线粒体嵴和线粒体外膜致密变不断加重;⑧与正常组大鼠比较,模型组大鼠精神萎靡,活动量明显减少并蜷缩弓背,毛发枯燥,耳部及脚趾苍白,面颊肿胀,夜尿多,血液暗红且浓稠。结论 腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃12周可制备大鼠CRF伴有心血管病变等并发症模型,可用于CRF及其心血管病变等并发症的防治研究;腺嘌呤诱导CRF大鼠模型证属脾肾阳虚、浊瘀阻滞,可用于温补脾肾,化瘀泄浊的中药组方防治CRF进展机制的研究。     

基于OS/NF-κB/炎症因子探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的作用机制

目的 通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭大鼠血清及肾组织中超氧化物歧化酶1（SOD1）、丙二醛（MDA）、晚期氧化蛋白产物（AOPP）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-p65）、白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α表达及心肾组织病理的影响,探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的可能作用机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃的方法建立实验性慢性肾功能衰竭并发心血管病变大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤中剂量组、加味真武汤高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第17周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）、尿肌酐（UCr）,第17周末各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、血钙、血钾、血磷、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清AOPP、IL-1β、TNF-α表达水平变化;苏木素-伊红（HE）染色法/马松染色（Masson）法观察心肾组织病理改变;透射电镜观察近端肾小管超微结构变化;免疫组织化学（IHC）法观察肾组织SOD1、MDA、AOPP、NF-κB p65、p-p65、IL-1β、TNF-α表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）观察肾组织SOD1、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测肾组织SOD1、MDA、NF-κB p65、p-p65表达水平。结果 ①与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高（P<0.01）,UCr显著降低（P<0.01）;模型组实验大鼠Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著增高（P<0.01）;模型组实验大鼠血清中AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著升高（P<0.01）;模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管官腔有褐色沉淀物阻塞,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多,心脏心肌纤维明显增粗,血管周围有少量炎细胞浸润,心脏血管周围和心肌细胞间有大量胶原纤维。模型组实验大鼠近端肾小管上皮细胞内可见高密度菱形针状结晶,溶酶体增多,线粒体增生、线粒体嵴和线粒体外膜致密变;模型组实验大鼠左心室舒张期心室壁厚度和收缩期心室壁厚度均升高;模型组实验大鼠MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达明显增强（P<0.01）,p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达明显增加（P<0.01）,SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱（P<0.01）;模型组实验大鼠肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达显著增强（P<0.01）,SOD1 mRNA表达显著减弱（P<0.01）;模型组实验大鼠肾组织SOD1蛋白表达显著下降（P<0.01）;MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著升高（P<0.01）。②与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低（P<0.01）,UCr显著升高（P<0.01）;Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著降低（P<0.01）;血清AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著下降（P<0.01）;心肾病理损害减轻;近端肾小管上皮细胞线粒体损伤减轻;MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱（P<0.01）,p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达显著减弱（P<0.01）,SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著增强（P<0.01）;肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达显著减少（P<0.01）,SOD1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;肾组织SOD1蛋白表达显著升高（P<0.01）,MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著降低（P<0.01）;中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味真武汤可能通过减轻近端肾小管上皮细胞氧化应激和线粒体损伤,从而减少氧化应激产物产生和抑制NF-κB信号通路激活引起的炎症因子释放,减轻对心肾组织及功能的损伤,实现延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的目的,且中药组具有量效趋势。     

基于AngⅡ/AT1R/NOX4信号通路探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭肾间质纤维化机制

目的 通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠血清及肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶4（NOX4）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、Ⅲ型胶原蛋白（COL3A1）表达的影响,探讨加味真武汤延缓CRF肾间质纤维化的可能作用机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃的方法建立实验性CRF大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第1周末、第13周末、第17周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）,第17周各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清AngⅡ表达水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色法观察肾组织病理改变;免疫组织化学（IHC）法观察AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）观察AT1R、NOX4、TGF-β mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测AT1R、NOX4、TGF-β₁表达水平。结果 ①与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高（P<0.01）;模型组实验大鼠Cr、BUN含量水平显著升高（P<0.01）,TP、ALB含量水平显著降低（P<0.01）;模型组实验大鼠血清AngⅡ含量显著升高（P<0.01）;模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,可见坏死肾小球,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管管腔有褐色沉淀物阻塞,无规整肾小管,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多;模型组实验大鼠AT1R、NOX4在肾小球、肾小管表达明显增强,TGF-β₁在肾小管表达明显增强,COL1A1、COL3A1在肾间质表达明显增强;模型组实验大鼠AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著增强（P<0.01）,NOX4 mRNA表达显著减弱（P<0.01）;AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著增强（P<0.01）。②与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低（P<0.01）;Cr、BUN含量水平显著降低（P<0.01）,TP、ALB含量水平显著升高（P<0.01）;AngⅡ含量显著下降（P<0.01）;肾脏病理损害减轻;AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1在肾小球、肾小管、肾间质达减弱;AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著下降（P<0.01）,NOX4 mRNA表达显著升高（P<0.01）;AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著减弱（P<0.01）;中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味真武汤可能通过降低CRF大鼠血清及肾组织中AngⅡ、AT1R、NOX4、TGF-β₁表达,延缓肾间质纤维化进展,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓CRF进展的目的,且中药组具有量效趋势。     

升降散加减方治疗IgAN大鼠作用机制探讨

目的 通过探讨疏通三焦、清热利湿理论指导下的升降散加减方对IgA肾病(immunoglobulin a nephropathy,IgAN)大鼠血清转化生长因子 β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、半乳糖缺乏-IgA(ga...     

基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨加味升降散治疗IgA肾病的作用机制

目的:基于网络药理学初步预测加味升降散治疗免疫球蛋白(Ig)A肾病(IgAN)的活性成分、作用靶点及信号通路,通过分子对接及动物实验验证探讨其可能作用机制.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),蛋白质数据库(UniProt Knowledge base)数据库,查阅文献及成分靶点预测数据库(Swiss...     

中医药治疗支气管哮喘的研究进展

从中医对支气管哮喘的基本认识出发,探讨该病的中医病因病机及辨证论治方法、临床常使用的治疗方法和药物,认为中医治疗哮喘在改善症状、减少复发、减少不良反应等方面有一定的优势,但仍然存在不足.