高温胁迫下半夏叶片总RNA变化及mRNA差异表达的研究

目的:分析半夏高温倒苗过程中总RNA及mRNA差异表达的变化规律,为研究半夏高温倒苗的分子机制提供了信息。方法:经过不同时间的高温胁迫处理,测定半夏叶片总RNA含量变化和mRNA表达的差异。结果:半夏叶片总RNA的含量变化分为3个降低阶段和2个升高阶段,胁迫0,6 h时含量最高,胁迫4,42 h和倒苗时含量最低,差异显示表明胁迫6h的样品条带多态性和带型与0 h的接近,其余胁迫时间的样品条带远少于0,6 h时的样品条带,并且在不同的样品之间均有mRNA差异条带出现。结论:在半夏经高温胁迫而倒苗的过程中,基因表达开启与关闭和基因表达增强与减弱模式具有一定的规律,并且可能启动了不同的基因表达系统。     

薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及IL-8，CXCL-12，VEGF表达的影响

目的:体外实验观察不同剂量薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及白细胞介素-8(IL-8),趋化因子-12(CXCL-12)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,阐释薄荷醇抗肝癌的作用及其相关机制。方法:设立薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)组以及空白组作用于肝癌HepG2细胞,利用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测方法检测薄荷醇对HepG2细胞增殖的影响,利用迁移实验(Transwell)检测薄荷醇对HepG2细胞迁移能力的影响,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测薄荷醇处理HepG2细胞炎症和趋化因子IL-8,CXCL-12 mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测薄荷醇处理对HepG2细胞中VEGF蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)在体外对HepG2细胞增殖和迁移均有抑制作用。薄荷醇100μmol·L-1时抑制作用明显(P 0. 05);薄荷醇(50,100,200μmol·L-1)对HepG2细胞迁移能力有明显抑制作用(P 0. 05),呈剂量依赖性。与空白组比较,薄荷醇(100,200μmol·L-1)均能显著抑制HepG2细胞中的IL-8,CXCL-12 mRNA和VEGF蛋白的表达水平(P 0. 05),进一步证实薄荷醇通过抑制炎症趋化因子起到抗癌作用。结论:薄荷醇在体外对肝癌HepG2细胞增殖、迁移具有明显抑制作用,潜在机制可能与其抑制细胞IL-8,CXCL-12,VEGF的表达有关。此结论为薄荷醇抗肝癌作用的阐释提供了实验依据。     

水杨酸刺激下半夏试管块茎悬浮培养及其生物碱的含量

目的:研究水杨酸刺激下半夏试管块茎悬浮培养及其体内生物碱含量的变化。方法:以半夏悬浮试管小块茎为材料,对其处理不同浓度的外源水杨酸刺激,分析块茎的生长情况,利用高效液相色谱法(HPLC)测定块茎中生物碱的含量。检测采用Agilent C_(18)色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(4∶96),柱温35℃,肌苷检测波长250 nm,鸟苷检测波长260 nm,流速1. 0 m L·min~(-1),进样量10μL。结果:外源添加不同浓度的水杨酸,处理不同的时间,半夏块茎的鲜重在第25天,水杨酸150μmol·L~(-1)时达到最大7. 483 8 g。同时积累了一定量的生物碱,鸟苷在0. 03～0. 45μg(R2=0. 999 6)线性关系良好,当水杨酸浓度为50μmol·L~(-1)时,培养10 d,半夏块茎中鸟苷的质量分数达到最大值1. 353 3 mg·g~(-1);肌苷在0. 003～0. 045μg(R2=0. 999 5)线性关系良好,在水杨酸浓度为200μmol·L~(-1)时,培养30 d,半夏块茎中肌苷的质量分数达到最大值0. 149 8 mg·g~(-1)。结论:该研究结果为半夏试管块茎的组培快繁和生物碱的调控研究提供参考,对半夏产业的发展具有十分重要的意义。     

半夏悬浮培养细胞的EMS诱变和耐高温突变体筛选

目的:确定EMS诱变处理半夏悬浮细胞的最适浓度和处理时间。方法:用0.1%,0.2%,0.4%,0.6%的EMS溶液,处理时间为0.5,1.0,2.0 h,对半夏悬浮细胞系进行诱变处理。结果与结论:结果表明,不同浓度的EMS和不同时间处理半夏悬浮细胞,结果有明显差异,在每个处理时间下,均是随着EMS浓度的增加而悬浮细胞的存活率逐渐下降。EMS诱变半夏悬浮细胞的适宜剂量为0.4%,最佳处理时间为1 h。     

宿半夏SRAP-PCR反应体系优化的研究

目的:研究宿半夏SRAP-PCR分子标记技术的优化体系.方法:采用L16(54)正交设计对宿半夏SRAP-PCR反应体系进行了5因素(dNTPs,Mg2+,模板DNA,引物,Taq酶)4水平优化筛选.结果:半夏SRAP最适合的正向引物是5’-TGAGTCCAAACCGGAAG-3’,反向引物为5’-GACTGCGTACGAATTACG-3’.优化的反应体系为25 μL反应体系中含有70 ngDNA模板,0.9μmol·L-引物,0.2 mmoL·L-1 dNTPs,1.5～2.0mmol· L-1Mg2+,2.0 UTaq酶.结论:宿半夏SRAP-PCR体系的建立为今后构建半夏SRAP遗传图谱奠定了基础.