NF-κB哑铃形诱骗剂ODN对骨髓瘤细胞生长及IL-6表达的抑制作用

目的设计合成靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂ODN,分析靶向NF-κB的哑铃形诱骗剂对NF-κB转录活性、多发性骨髓瘤细胞8266的生长及其分泌的IL-6的抑制效应。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)体外检测诱骗剂ODN对NF-κB转录活性的抑制效应。将8266细胞随机分为传代培养的8266细胞组;诱骗剂ODN处理组及脂质体处理组。通过阳离子脂质体以2mg/L、4mg/L、8mg/L不同剂量诱骗剂ODN转染8266细胞。转染后8、12、18h,ELISA法检测8266细胞培养上清中IL-6的表达。用MTT比色检查诱骗剂ODN对IL-6刺激的8266细胞生长的影响。结果硫代磷酸的诱骗剂ODN在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;2mg/L、4mg/L、8mg/L等不同浓度的脂质体-ODN复合物对8266细胞表达IL-6的抑制程度不同。脂质体-ODN复合物对8266细胞的生长及IL-6的活性均有抑制作用。结论靶向NF-κB的诱骗剂ODN在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而抑制8266细胞的生长,降低瘤细胞中IL-6的表达。     

SYSMEX XN9000血细胞分析仪PLT-F通道在异常血小板计数中性能评估

目的评估SYSMEX XN9000血细胞分析仪PLT-F通道在异常PLT计数及异常直方图中应用的准确性。方法收集EDTA抗凝全血标本,采用电阻抗法(PLT-I)、荧光法(PLT-F)和手工法(PLT-M)计数血小板,且以PLT-M为标准进行比较,资料分为低值PLT组、小红细胞组、大血小板组,分别使用简单线性回归和差值百分比Bland-Altman图进行比较,结合临床血液学检验常规项目分析质量要求判断2种方法的一致性及优劣性。结果低值PLT在PLT-F通道的检测结果与PLT-M具有更高的相关性和一致性;PLT-F通道在小红细胞组相关性与PLTI接近,但与PLT-M比较系统误差较小;PLT-F通道在大血小板组与PLT-M相关性和一致性均优于PLT-I通道。结论在低值PLT、小红细胞和大血小板出现时,PLT-F通道可以替代PLT-M成为快速准确的复检方法。     

标本周转时间在实验室管理中的优化探讨

目的:通过研究影响标本周转时间(TAT)的原因,探讨在实验室管理过程中优化TAT的措施,更好的优化患者检验流程,提高检验效率及实验室的管理水平。方法:利用实验室信息系统(LIS)采集2017年1至12月西安交通大学第一附属医院检验科使用同一检测系统血、尿、粪便常规,生化、血凝、免疫检测项目的TAT数据,采用SPSS 13.0软件对不同检测项目的各节点时间分布以及检验人员工作效率数据对TAT的影响进行统计分析。结果:血、尿、粪便常规,生化、血凝、免疫检测项目TAT基本符合科室质量目标要求,门诊患者TAT明显小于住院患者。检验流程中样本接收处理、检测、审核节点时段集中以及不同人员工作效率存在差异现象(P=0.198)是导致TAT延迟的重要原因。结论:改进样本处理手段,优化检验流程,提高工作人员工作效率以及采用自动分检和审核系统可以有效缩短TAT。     

抗人宫颈癌单链抗体的表达、结构预测和功能分析

目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体（ScFv）基因;对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因,进行TG1和HB2151两个原核体系的表达;SDS-PAGE、Western blotting、竞争抑制实验、免疫组化反应检测ScFv;用Antheprot 4．3软件、Swiss-model、3dpssm进行蛋白理化性质分析和立体结构模拟。结果抗人宫颈癌可溶性ScFv大小为32000左右,与预计蛋白相对分子质量相符;可溶性和展示性ScFv均可与人宫颈癌细胞株细胞膜表面抗原结合。免疫组化显示能与宫颈癌组织特异性结合而不与正常宫颈组织和其他肿瘤组织结合。ScFv蛋白等电点预测值为7．215,属于α＋β蛋白;VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。三维结构预测显示linker贴近。使VL和VH形成一个疏水的“口袋”。这一结构有利于抗原的结合。结论经基因工程方法制备的抗人宫颈癌ScFv具有与亲本单克隆抗体相似的抗体活性和特异性。抗人宫颈癌ScFv构建为进一步构建双特异性ScFv和双功能ScFc基因创造了条件;其成功的表达为人宫颈癌的早期诊断和特异性治疗打下了基础。计算机对ScFv蛋白的空间结构的模拟和理化性质的分析为ScFv的进一步政建和抗原、抗体反应的研究提供了宝贵的资料。     

2型糖尿病和糖尿病并发肾病患者糖化白蛋白及其相关代谢标志物水平的检测及其意义

［摘 要］ 目的：检测2型糖尿病及糖尿病并发肾病(DN)患者糖化白蛋白（GA）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血脂和同型半胱氨酸（Hcy）等代谢标志物的表达水平,分析上述指标与尿微量白蛋白/肌酐比值（ACR）的相关性,探讨GA、HbA1c等代谢标志物对糖尿病及DN早期诊断及治疗监测的意义。方法：选取178例糖尿病患者作为病例组（其中70例单纯糖尿病患者,108例DN患者),病例组患者按ACR分为糖尿病无肾病组(正常清蛋白尿组)、早期DN组(微量白蛋白尿组)和临床DN组(大量白蛋白尿组)。另选100名健康人作为对照组。分别记录所有受检者年龄、性别,检测身高、体质量、血压、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、脂蛋白a (Lpa)、Hcy、HbA1c、GA、尿微量清蛋白及尿肌酐,计算ACR并进行比较,分析各项指标水平的改变与糖尿病DN的相关性。结果：与对照组比较,病例组患者的GA、HbA1c、TG、TC、LPa和Hcy水平均有显著升高的趋势（P<0.01）;3个病例组间,随着各组患者ACR的升高,其GA、HbA1c、TG、Lpa和Hcy水平均有上升趋势（P<0.05）,TC水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05); GA、HbA1c、TG、Lpa、Hcy与ACR的变化具有相关性（GA：r=0.89,HbA1c：r=0.91,TG：r=0.62,Lpa：r=0.78,Hcy：r=0.72,均P<0.05）;TG、LPa、Hcy的变化与HbA1c、GA水平的改变无显著的相关性(TG：r=0.31,r=0.41,P>0.05;Lpa：r=0.27, r=0.42,P>0.05;Hcy：r=0.24,r=0.33,均P>0.05)。结论：GA及其相关标志物在2型糖尿病和DN患者中表达异常,并与病程密切相关。联合检测GA及糖尿病相关标志物对糖尿病及其并发症的早期诊断、治疗和预后有一定的临床指导意义。     

凝血因子Ⅻ基因Val 34 Leu突变与脑梗死关系的研究

目的观察中国陕西汉族人群中凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)基因Val 34 Leu的变异,并探讨其与脑梗死发病的关系.方法收集65例陕西地区汉族脑梗死患者和65名健康体检者的外周静脉血;采用酚-氯仿抽提技术提取基因组DNA,聚合酶链反应-单链构象多态性分析与随机测序的方法检测基因的突变.结果脑梗死组与健康对照组均不存在FⅩⅢVal 34 Leu的突变.结论(1)中国陕西地区乃至中国的汉族人群中FⅩⅢVal 34 Leu的突变频率很低;(2)FⅩⅢVal 34 Leu的突变可能不是中国人突变的热点部位.     

pTracer/mIFN-γ基因修饰对小鼠胚胎干细胞细胞生物学特性的影响

目的: 探讨IFN-γ基因转染对小鼠ES细胞生物特性的影响. 方法: 电穿孔法将pTracer/mIFN-γ共表达载体转入小鼠ES细胞,荧光倒置显微镜下观测绿色荧光,RT-PCR, ELISA检测转基因ES细胞IFN-γ表达. 碱性磷酸酶染色,测定ES/pTracer/mIFN-γ和ES细胞的细胞克隆形成率;无血清培养法诱导ES/pTracer/mIFN-γ细胞定向分化为神经前体细胞(NPCs),免疫组化法检测nestin表达. 结果: 转染共表达载体pTracer/mIFN-γ的ES/pTracer/mIFN-γ细胞发绿色荧光,有IFN-γ表达,转染72 h后的细胞培养液中IFN-γ量为(44.25±12.23) μg/L;ES细胞和ES/PTracer/mIFN-γ细胞的集落形成率分别为73.66%和70.89%,差异无显著性. ES/pTracer/mIFN-γ细胞经诱导可分化为nestin阳性NPCs. 结论: IFN-γ基因转染对ES细胞的未分化特性、增殖能力及向神经系统分化潜能无明显影响.     

抗人肝癌单克隆抗体HCD78的制备及免疫组化定位

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，具有发病隐袭、病死率高的特点，早期诊断对预后的意义重大。单克隆抗体（ｍＡｂ）技术问世后，人们试图通过应用抗肝癌ｍＡｂ提高肝癌的早期诊断率。然而目前获得的抗肝癌ｍＡｂ识别的抗原都不是肝癌特异性抗原，而且由于肿瘤异质性的存在，又使其临床应用受到一定影响。本研究应用自建的人肝癌细胞株ＨＣ１０８免疫小鼠，制备了１株能稳定分泌抗人肝癌ｍＡｂ的杂交瘤细胞。免疫组化证实，该ｍＡｂ具有较好的特异性，其识别的肿瘤抗原主要定位于细胞膜。现将建株过程和初步鉴定的结果报道如下：１…     

人膀胱移行细胞癌细胞株BLZ—211的生物学特性

以膀胱移行细胞癌患者的肿瘤标本为材料建立了１株克隆性膀胱癌细胞株ＢＬＺ－２１１，体外培养３年多，传代１５０次，没有支原体污染。生物学特性鉴定：光镜和超微结构显著该细胞具有膀胱移行细胞细胞特征。