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含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化E.coliM15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF]。MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF。结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%。复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性。结论:以E.coliM15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段。 相似文献
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目的和方法 :对重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK -A)进行纯化 ,并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚集状态进行测定。NDPK -A工程菌发酵后的菌体高压匀浆 ,然后微滤、超滤处理 ,所得样品经DEAE阴离子交换、Cibacronblue亲和层析、分子筛层析 3步纯化后 ,以SDS -PAGE和RP -HPLC分析纯化产物的纯度 ,RP -HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定分子量 ;Edman降解法测定N末端序列 ;多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果 :rhNDPK -A纯化产物的SDS -PAGE纯度为 97 3% ,RP -HPLC纯… 相似文献
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目的:验证钴60辐照灭活猪源性人工骨钉中指示病毒PRV活性的有效性。方法:首先利用CPE法测定不同辐照剂量γ射线灭活样品后指示病毒的感染活性,初步确定有效辐照剂量;然后利用三批样品对该辐照剂量灭活效果进行验证,辐照前后人工骨钉中指示病毒的滴度采用96孔板CPE法滴定。结果:CPE法测定结果显示,经20kGy及以上辐照剂量处理的样品中指示病毒PRV不能使宿主细胞PK-15出现细胞病变;三批样品经20kGy辐照剂量处理后,指示病毒PRV滴度下降值⊿lgTCID50分别>4.06,>4.75,>4.28,⊿lgTCID50值均大于4。结论:辐照剂量为20kGy的钴60γ射线辐照猪源性人工骨钉可以作为灭活PRV的有效手段。 相似文献
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重组人Nm23-H1/NDPK-A蛋白抗血清的制备与鉴定 总被引:4,自引:2,他引:2
目的:通过实验,制备出NDPK-A蛋白的抗血清,为国内NDPK-A的诊断试剂盒的研究开发提供基础条件。方法:重组人肿瘤转移相关蛋白Nm23-H1/NDPK-A蛋白经Macro-prepDEAE阴离子交换柱层析和CibacronBlue亲和层析,得到了电泳纯的NDPK-A蛋白,以此制备抗原,免疫新西兰纯种兔,进而得到NDPK-A蛋白的抗血清。结果:ELISA法检测所制备的抗体的反应效价为:1:400-800。结论:westernblot试验结果证实。该抗血清具备较好的特异性。能与NDPK-A蛋白发生反应,可应用于NDPK-A蛋白的实验检测利临床检测。 相似文献
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为制备纯化的灭活SARS病毒,取广东省CDC提供的灭活SARS-CoV病毒培养液进行超滤,收集相对分子质量介于100000至500000之间的组分,并浓缩。对纯化过程中各组分进行抗原活性鉴定和蛋白质含量测定,并加佐剂后免疫动物,测定抗体免疫应答。结果表明,超滤后活性抗原蛋白质回收率7.6%,纯化倍数为9,抗原活性达到1:480。免疫家兔获得的血清ELISA效价达到1:10000以上,中和抗体效价达到1:2000以上。表明该纯化工艺能获得较高纯度的灭活SARS-CoV病毒颗粒。 相似文献
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目的:纯化CVN重组蛋白,检测其抗病毒活性,制备CVN多克隆抗体,并对其进行纯化和修饰。方法:利用两步Ni-NTA亲和层析和一步SUMO酶切制备CVN抗原,CPE法观察其抗病毒活性,活性抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot鉴定其效价和特异性,抗血清经硫酸铵初步沉淀和DEAE离子交换层析获得纯化抗体,纯化抗体通过辣根过氧化物酶(HRP)标记获得修饰抗体。结果:纯化获得纯度达95%以上且具有明显抗流感病毒作用的非融合CVN,利用所得CVN抗原成功制备CVN多克隆抗体,酶联免疫分析显示其效价达到1∶16 000以上,Western blot分析表明其具明显特异性。抗血清经盐析和DEAE离子柱层析后获得效价为1∶6 400高纯度纯化抗体,经HRP修饰后获得具有较高生物活性的标记抗体。结论:获得高纯度,高效价兔抗CVN多克隆抗体,以及HRP标记的兔抗CVN多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。 相似文献
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钱垂文 《国外医学(肿瘤学分册)》2000,27(4):211-213
正常细胞转化成癌细胞的分子机制一直是肿瘤学研究的热点。但通过特定条件在体外培养基中转化正常人类细胞极难成功。最近在这方面的研究取得了突破性进展,成功地实现了特定条件下(即利用特定基因或其产物)将人工培养的人类正常细胞转化成癌细胞,本文将简要介绍这种转化过程及其分子肿瘤学基础。 相似文献
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目的:研究不同反应体系对NDPK酶活性测定结果的影响。方法:分别以(UTP ADP)和(ATP UDP)作为反应底物,加入自制的rhNDPK-A蛋白,以100mmol/L磷酸二氢钾、20mmol/L乙酸、5mmol/L四丁基溴化铵,pH5.0作为流动相A液,A液 25%乙腈作为B液,等梯度混合,C18柱,柱温25%,流速1.0ml/min,检测波长254nm。结果:以(UTP ADP)和(ATP UDP)作为反应底物测定的酶比活分别为210U/mg、860U/mg。结论:不同反应体系对HPLC法测定NDPK酶活性有显著差异。 相似文献
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Nm23家族共有8个成员,其蛋白产物为核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDPK)。NDPK的研究历史可以追溯到50年前,作为一种管家酶,NDPK的首要功能是通过催化二磷酸核苷(nucleoside diphosphate,NDP)和三磷酸核苷(nucleoside triphosphate,NTP)之间的磷酸基转移反应来维持细胞内的NTP浓度。近年来的研究发现,NDPK可以调节细胞增殖、分化、发育和凋亡。研究NDPK的多能性及其调控机制对于阐明细胞增殖和分化、肿瘤发生、发展和转移,甚至个体发育,都有重要意义。 相似文献
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目的:评价肝欣泰注射液抗肝损伤的药理作用。方法:采用细胞学实验和经典四氯化碳(cch)致小鼠急性肝损伤模型,观察肝欣泰注射液对HepG2.2.15细胞表达HBeAg和HBsAg、小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶水平以及肝脏组织形态学的影响。结果:肝欣泰注射液对HepG2.2.15细胞表达HBeAg和HBsAg无抑制作用;CCl4致肝损伤动物模型病理切片显示肝欣泰注射液可以减轻肝脏组织损伤的程度,对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶含量无明显影响。结论:肝欣泰注射液具有一定程度的抗肝损伤作用。 相似文献