基因变构IL-2重组克隆的构建

①目的 构建基因变构IL-2（88ArgIL-2)的重组克隆。②方法 将正常人的扁桃体细胞经PHA刺激后，获得cDNA文库，并以此为模板，经套式PCR扩增得IL-2的基因编码序列。测序确认正确后，设计含有突变位点的引物，经pCR定点诱变技术获得变构IL-2克隆并进行序列确定。③结果 IL-2基因定点诱变成功，并获得了基因变构IL-2重组克隆。④结论 IL-2重组基因变构克隆的构建为进一步在原核和真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型基因变构IL-2奠定了基础。     

SARS冠状病毒刺突蛋白编码基因及氨基酸序列的同源性分析

①目的 分析严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白(S蛋白)编码基因及氨基酸序列的变异情况，并在GenBank中寻找其同源序列。②方法 将网上公布的具有全基因序列的12株SARS冠状病毒S蛋白的编码基因序列及氨基酸序列应用Clustal W方法对排分析变异情况，并应用GenBank的Blast对排功能寻找被GenBank收录的同源序列。③结果 SARS冠状病毒S蛋白相对比较保守，变异率较低，其氨基酸序列与鼠的肝炎病毒氨基酸序列有较高的同源性，某些核苷酸序列与人的基因组有同源性。④结论 S蛋白编码基因及氨基酸序列相对保守，为预防性疫苗的研发提供了可行性；据其同源基因及蛋白序列可以预测S蛋白的二、三级结构，对推测SARS可能的发病机制有积极作用。     

HIV-1 SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达

①目的 构建HIV-1SF2株env基因C1与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆菌中表达。②方法 用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因组的9B1R6质粒为模板，PCR法分别扩增出env基因C1和C3段；两个片段经KpnⅠ酶切、T4连接酶连接和扩增后，再将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的嵌合片段插入表达载体pGEX-4T-2中，构建重组表达质粒pGEX-4T-2／ClC3；重组质粒经酶切、测序鉴定后，以TSS法转入大肠杆菌DH5α，IPTG诱导表达融合蛋白和SDS—PAGE电泳分析表达蛋白图谱。③结果 经酶切和测序分析，插入片段大小、方向和读码框架正确，无碱基错配，表明成功构建pGEX-4T-2／ClC3克隆；重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导，高效表达出相对分子质量为4．3万的融合蛋白。④结论 重组质粒pGEX-4T-2／C1C3的构建和表达成功，为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。     

基础医学实验课程体系的建立与实践

目的探讨基础医学实验课程新体系的建立及实践效果。方法新的基础医学实验课程体系融合了20多门基础医学课程的实验内容,构建了人体形态学、人体功能学、显微结构学、病原生物学、细胞与分子生物学5个实验教学模块,将实验内容分3个层次设置,对实验教学方法和考核方式等进行了创新。结果基础医学实验教学课程新体系的建立,在实验教学实践中取得了显著的效果。结论新体系全面提高了实验教学水平和学生的综合素质。     

新诊断2型糖尿病患者采取沙格列汀联合二甲双胍治疗的疗效及安全性分析

目的：探究新诊断2型糖尿病患者开展沙格列汀联合二甲双胍治疗的临床疗效及安全性,并为这类患者最优化诊疗服务积累循证经验。方法选取该院内分泌科2012年2月—2014年1月收治的94例新诊断2型糖尿病患者,利用随机数字表法进行分组,分别设为观察组和对照组,每组各47例。其中对照组给予阿卡波糖联合二甲双胍治疗方案,观察组给予沙格列汀联合二甲双胍治疗方案。记录二组患者治疗前后空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数（HOM A －IR）、体重及体质指数,同时比较二组服药依从性情况及不良反应发生率。结果二组治疗前FBG、2hPG及HbA1 c值差异无统计学意义（P＞0．05）;治疗后,观察组FBG、2hPG及 HbA1 c值均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。二组治疗前空腹胰岛素水平及 HOMA －IR值差异无统计学意义（P＞0．05）;治疗后,观察组空腹胰岛素水平高于对照组（P＜0．05）,HOMA －IR值低于对照组（P＜0．05）。二组治疗期间低血糖发生率差异无统计学意义（P＞0．05）;观察组 HbA1 c达标率高于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。二组治疗前后体重及体重指数差异无统计学意义（P＞0．05）。观察组药物漏服率及错服率均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论二甲双胍配伍沙格列汀治疗2型糖尿病患者的临床疗效优于二甲双胍配伍阿卡波糖方案,且安全性尚佳,值得在临床上进一步推广。     

ATF-5在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的研究转录激活因子5（ATF-5）在人结直肠癌组织中的表达及其意义。方法选取我院结直肠癌组织标本38例,正常结直肠组织标本12例,采用RT—PCR法检测两种组织标本中ATF_5的表达水平。结果38例结直肠癌组织标本中有32例ATF-5阳性表达,12例正常结直肠组织标本中无ATF-5阳性表达,两者比较差异有显著性（χ^2=24．53,P％0．01）。结论结直肠癌组织中ATF-5高表达,ATF-5可能在结直肠癌的发生、发展中起关键作用。     

HLA-B27基因亚型检测与强直性脊柱炎相关性研究

目的探讨HLA-B27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性。方法采用酵素免疫法检测HLA-B27，并进一步采用聚合酶链反应序列特异性引物法进行HLA-B27基因亚型分型。结果强直性脊柱炎HLA-B27检出率为95％，显著高于正常对照组，基因分型B2705分布最广（59.3％），其次是B2704（38．9％）。结论HLA-B27与AS具有明显的相关性，检测B2705和B2704亚型对于AS的辅助诊断具有重要意义。     

体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达

目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异．方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3 及WCX2芯片检测HepG2、L02的蛋白质谱．结果:体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株的蛋白质存在差异表达,IMAC3芯片共捕获61个蛋白,发现差异峰7个,与 L02细胞相比,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,4个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．WCX2芯片共捕获91个蛋白, 发现差异峰14个,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,11 个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好．     

风疹病毒E1膜抗原的原核表达与纯化鉴定

①目的 重组表达风疹病毒（RV）E1膜蛋白的抗原决定簇多肽，探索制备用于RV血清学检测的基因工程抗原。②方法 通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增RV E1膜蛋白212-241位氨基酸的编码基在片段nt8886-8976,将此片重组于质粒载体pGEX4T-2上，在大肠杆菌中表达目的多肽片与谷胱甘肽巯基转移酶（GST）的融合蛋白，纯化融合蛋白并经Western-Blot鉴定其抗原性。③结果 有效的表达出相对分子质量约为33000的融合蛋白，经Western-Blot检测结果证实可与RV的单克隆抗体发生特异性结合反应。④结论 在原核表达系统中有效地表达了保留风疹病毒抗原性的融合蛋白，为今后进一步研制RV重组抗原提供了方法学和实验室基础。     

SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

①目的 了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法 分别将具有明确致病性的22种冠状病毒(包括6株SARS病毒)S蛋白编码序列和22种冠状病毒全基因序列(包括11株SARS病毒)进行对排并绘制系统发生树，观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置，预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果 在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确，与其在美国国立医学图书馆(NCBI)中的分类相一致。④结论 SARS病毒县需特病毒的一个新的变种，具有呼吸道上皮嗜性。