替比夫定对慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞动态变化的影响及其临床意义

目的 探讨替比夫定抗病毒治疗过程中慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例的变化及其临床意义.方法 选取给予替比夫定抗病毒治疗的CHB患者36例,在治疗前及治疗后3、6、9个月时,分别以流式细胞仪检测外周血Tregs比例(以CD4+CD25<'high>T细胞作为Tregs),荧光定量PCR检测血清HBV DNA水平,酶联免疫吸附法检测HBV标志物,全自动生化分析仪检测ALT水平.结果 CHB患者外周血Tregs比例明显高于对照组(P<0.01).替比夫定抗病毒治疗过程中,CHB患者外周血Tregs比例逐步下降,治疗6、9个月时基本恢复正常水平;HBV DNA水平降至检测水平以下的CHB患者(30例)在Tregs比例明显下降的CHB患者中所占比例(7/7,100.0%)高于Tregs比例无明显下降的CHB患者(23/29,79.3%),但两者差异无统计学意义(P>0.05).治疗3、6、9个月时,HBeAg阴转率分别为11.1%、19.4%、25.0%,其中7例(19.4%)发生HBeAg血清学转换者在治疗3、6个月时Tregs比例均已降至正常人水平.结论 替比夫定抗病毒治疗过程中,能降低CHB患者外周血Tregs比例,治疗早期Tregs比例下降的患者HBeAg血清学转换率更高.     

中药内服外敷治疗输卵管不通所致不孕35例

输卵管不通是女性不孕尤其是继发性不孕的重要原因,多由于盆腔慢性炎症导致输卵管腔粘连、僵硬,或受周围瘢痕组织牵拉、扭曲或闭塞,使输卵管丧失其输送精子、卵子、孕卵的生理功能,造成不孕.中医认为,任主胞胎,冲为血海,冲任瘀阻,胞络涩滞则造成不孕. 故本病可见于中医的不孕、月经不调、痛经、带下等病中.笔者近年来以活血化瘀、疏通卵道为原则,以生水蛭粉为主药,结合其他中药内服外敷,治疗输卵管不通所致不孕症35例, 取得较好疗效,现报告如下.     

介入治疗急性下肢深静脉血栓的体会

目的 分析急性下肢深静脉血栓(DVT)介入治疗的方法及疗效,并进行临床资料和并发症的总结.方法 收集2004年1月-2011年11月DVT患者28例,先经健侧股静脉穿刺置管行髂股静脉造影明确血栓的部位与程度.对所有患者放置下腔静脉滤器.采用导管溶栓、扩张球囊破栓.若球囊对狭窄部扩张疗效较差者,则植入支架,3例髂总静脉植入支架.对髂、股静脉开口闭塞者行超声引导下腘静脉穿刺.根据溶栓的不同阶段采用不同的给药方法,如团注、滴注和双路法.结果 28例滤器放置成功率位100%,留置导管时间为3-8天,平均为6天.治愈为22例,有效为6例.结论 介入治疗急性下肢深静脉血栓安全可靠、疗效肯定.     

抑癌基因KLF6在肝癌HepG2细胞修复DNA损伤过程中的作用研究

目的：研究抑癌基因KLF6对肝癌HepG2细胞修复DNA损伤能力的影响。 方法: RT-PCR及Western blotting技术测定HepG2细胞在5 mg/L顺铂作用12、24、36 h后KLF6 mRNA及其蛋白水平变化。采用宿主细胞再活化反应(HCR)检测KLF6稳定表达HepG2细胞修复DNA损伤的能力。结果： 在5 mg/L顺铂作用下,随作用时间延长,KLF6 mRNA及其蛋白水平增高,但作用36 h,KLF6 蛋白水平下降。KLF6稳定表达HepG2细胞修复被顺铂损伤质粒DNA的能力明显高于对照组。结论： DNA损伤能诱导肝癌HepG2细胞KLF6基因表达,KLF6基因在细胞DNA损伤修复过程中发挥一定作用。     

成人大骨节病的X线表现

目的总结成人大骨节病的影像表现,提高对该病的认识。方法分析6例成人大骨节病的临床和影像检查结果。结果其中3例表现为手、腕和踝部,2例只表现双踝及跟骨短小,另1例表现为双手腕、双髋、双膝及双踝部。结论X线检查可确诊该病,但需结合地方流行病史。     

慢性乙型肝炎患者MoDCs表面PD-L1分子的表达及其对T淋巴细胞功能的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞来源的树突状细胞(MoDCs)表面PD-L1的表达水平及其对MoDCs诱导的HBV特异性T淋巴细胞功能的影响.方法 采用流式细胞术检测CHB患者、慢性乙型肝炎病毒携带者(ASC组)、健康对照者(NC组)外周血MoDCs表面PD-L1的表达,采用全自动生化分析仪检测ALT(正常参考值< 40 U/L)和荧光定量聚合酶链反应测定HBV DNA水平.替比夫定抗病毒治疗前后分别体外培养CHB患者的MoDCs.流式细胞术检测MoDCs表面PD-L1表达的变化;负载HBsAg的MoDCs和异体T淋巴细胞混合培养,以PD-L1单克隆抗体阻断PD-L1/PD-1途径后,MTT法检测HBV特异性T淋巴细胞增殖能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定混合淋巴细胞反应(MLR)上清液中IL-12、IFN-γ和IL-10的浓度.结果 CHB患者外周血MoDC表面PD-L1的表达高于ASC组和NC组,且与患者ALT、HBV DNA水平呈正相关.随抗病毒时间的延长,MoDCs表面PD-L1水平下降,但差异无统计学意义(P> 0.05).封闭PD-L1途径后,MoDCs诱导的T淋巴细胞的增殖能力及MLR中IL-12、IFN-γ水平均升高,IL-10水平降低的程度大于相应的未封闭PD-L1途径组.结论 CHB患者外周血MoDCs表面PD-L1表达水平的升高,降低了HBV特异性T淋巴细胞免疫功能;替比夫定抗病毒治疗对MoDCs表面PD-L1的表达无显著影响;阻断PD-L1/PD-1途径能够提高MoDCs诱导的HBV特异性T淋巴细胞免疫反应.     

厚皮性骨膜病

目的总结厚皮性骨膜病的X表现,提高该病的认识。方法回顾性分析3例厚皮性骨膜病的临床表现和X线检查结果。结果2例为青春期男性,1例为青少年男性。结论X线检查显示厚皮性骨膜病非常有价值,结合临床可确诊该病。     

阻断PD-1／PD—L1信号通路对负载HBsAg的树突细胞抗HBV免疫功能的影响

目的探讨阻断PD—1／PD—L1信号通路后,负载HBsAg的树突细胞（dendritic cells,DC）诱导HBV转基因小鼠免疫应答的作用特点。方法体外诱导扩增BALB／c小鼠骨髓来源的DC,尾静脉免疫HBV转基因小鼠（其中在DC免疫前1d腹腔注射PD—L1抗体,共3次）。实验分5组进行：DC／HBsAg＋PD—L1抗体组、DC／HBsAg组、DC组、mIgG组和磷酸盐缓冲液（PBS）组,分别以流式细胞术、乳酸脱氢酶（LDH）释放法、酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量聚合酶链反应（PCR）等检测HBV转基因小鼠脾脏淋巴细胞增殖及细胞内干扰素γ（IFNγ）、特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性及血清HBsAg、HBV DNA和丙氨酸转氨酶（ALT）水平。采用SPSS13．0统计软件进行分析,组间比较采用ANOVA方差分析和q检验。结果免疫后第3天和第6天,DC／HBsAg＋PD—L1抗体组与其他各组比较在诱导CD3^＋CD8^＋T淋巴细胞增殖及IFNγ分泌方面差异有统计学意义（细胞增殖：F值分别为25．22和39．01,P值均〈0．01;IFNγ分泌：F值分别为32．35和36．98,P值均〈0．01）;而DC／HBsAg组与DC组淋巴细胞增殖能力比较仅在第3天有统计学意义（t=6．79,P=0．012）。特异性CTL的活性在DC／HBsAg＋PD—L1抗体组明显升高。各组血清HBsAg在第6天差异有统计学意义（F=6．12,P〈0．05）。DC／HBsAg＋PD—L1抗体组血清ALT水平与DC／HBsAg组比较在第3天无差异,与其他各组比较在第3和第6天差异有统计学意义（F值分别为19．22和14．30,P值均〈0．05）。各组对HBV DNA的清除能力没有差别,但DC／HBsAg＋PD—L1抗体组有1只小鼠病毒载量下降1个数量级。结论封闭PD-1／PD—L1信号通路能通过提高特异性CD^3＋CD8^＋T淋巴细胞增殖及其分泌IFNγ能力,进而促进负载HBsAg的DC诱导转基因小鼠抗HBV免疫能力。     

抑癌基因kruppel样因子6及其剪接体蛋白对HepG2细胞增殖和分化的影响

目的 研究抑癌基因Kruppel样因子(KLF)6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响. 方法 RT-PCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列;构建KLF6剪接体真核表达质粒pcDNA3.1A(-)/KLF6V.转染HepG2细胞后,经G418筛选获得稳定表达KLF6全长和其剪接体蛋白的HepG2细胞,分别命名为HepG2/KLF6和HepG2/KLF6V.四甲基偶氮唑盐法测定该两种HepG2细胞的增殖活性;同时分别以放射免疫法或Western blot技术测定白蛋白、甲胎蛋白或P21WAF1,细胞周期素D1蛋白在HepG2/KLF6或HepG2/KLF6V细胞中的表达情况.结果从肝细胞癌组织中扩增出一种KLF6剪接体,序列分析提示该剪接体缺失127 nt,引起KLF6蛋白近羧基端缺失42个氨基酸;KLF6V mRNA在肝癌及癌旁组织均有表达,但癌组织表达水平明显增高.HepG2/KLF6细胞生长速度较慢而HepG2/KLF6V细胞增殖较快,同时HepG2/KLF6细胞P21WAF1蛋白表达及白蛋白分泌水平明显高于HepG2/KLF6V细胞,而细胞周期素D1表达及甲胎蛋白分泌水平在HepG2/KLF6V细胞高于HepG2/KLF6细胞.结论 肝细胞癌组织中存在KLF6剪接体,该剪接体能对抗全长KLF6基因抑制细胞生长、促进细胞分化等的功能.     

220例血清HBV DNA≤2 000 IU/mL的代偿期肝硬化患者肝功能评价指标、并发症分析

目的 了解血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA≤2 000 IU/mL的乙型肝炎病毒（HBV）相关代偿期肝硬化患者的肝功能及并发症发生情况，为后续临床诊疗提供依据。方法 220例血清HBV DNA≤2 000IU/mL的HBV相关代偿期肝硬化患者，收集其肝功能评价指标资料和并发症资料。结果 220例患者肝功能生化指标血清甲胎蛋白为4.80(2.12,8.35)ng/mL、总胆红素为18.90(14.10,28.76)μmol/L，白蛋白为39.35(34.60,43.90)g/L、肌酐为64(56,73.52)μmol/L、丙氨酸转氨酶为31.73(21.12,52.17)U/L、天冬氨酸转氨酶为30.35(23.85,48.85)U/L、γ-谷氨酰转肽酶42.70(24,66.08)U/L、碱性磷酸酶为82.05(63.38,113)U/L、血小板为105(57.25,158)×109/L、凝血酶原活动度为81.03%(66%,93.97%)、国际标准化比值为1.09(1.02,1.21)；肝功能CTP分级以A级为主，终末期肝病模型评分（8.91±3.78）分、天冬氨酸转移酶及血小板比率...