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1.
目的观察同种异体心肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌的修复作用和心功能的影响。方法选取110只雄性SD大鼠用于制作心肌梗死模型,术后2周共存活53只,死亡57只。从53只建模成功的SD大鼠中随机选取30只分为3组(每组10只):心肌细胞移植组(A组)、培养液基质注射组(B组)和单纯心肌梗死组(C组)。A组将原代培养的乳鼠心肌细胞移植到心肌梗死区和梗死边缘区;B组采用与A组同样方法在心肌梗死区和梗死边缘区注射细胞培养液基质;C组不做任何处理。2周后观察A组移植细胞存活情况。采用Langendorff装置检测各组左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)和左心室做功(LVW)。结果A组与B组及C组相比,LVSP分别从(47.9±4.6)mmHg和(47.6±3.9)mmHg升高到(52.0±3.0)mmHg(P〈0.05或P〈0.01);LVEDP分别从(18.8±2.7)mmHg和(24.7±5.8)mmHg降低到(15.8±1.5)mmHg(P〈0.05或P〈0.01);+dp/dtmax分别从(1 900±198)mmHg/s和(1 737±347)mmHg/s升高到(2 260±337)mmHg/s(P〈0.05)。3组间-dp/dtmax和LVW比较差异无显著性(P〉0.05)。A组大鼠的心肌中均发现移入的乳鼠心肌细胞,经5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记的免疫组化染色和抗心肌肌钙蛋白I抗体(anti-cTn I)标记的免疫组化染色证明移入的细胞是心肌细胞。结论异体移植的乳鼠心肌细胞可在心肌梗死区存活,并能改善心功能,尤其是改善左心室收缩功能。 相似文献
2.
目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞,用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF,用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%(P<0.05)。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制,表达水平降低40%(P<0.05)。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达,建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。 相似文献
3.
4.
VEGF_(165)和Angiopoietin-1 cDNA治疗缺血心肌的实验研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨血管内皮生长因子165(VEGF_(165))和血管生成素1(Angiopoietin-1,Ang1)基因导入对心肌缺血的治疗作用。方法分别构建编码VEGF_(165)和Ang1的真核表达载体。结扎SD大鼠冠状动脉前降支后1周,将缺血模型随机分为实验组(n=7)和对照组(n=7),在缺血区周围心肌内分别注射VEGF_(165)和Ang1的重组质粒和空质粒。1周后收取心脏,通过Langendorff心脏灌注模型实验,测定离体心脏的心功能。用免疫组织化学方法测定心肌注射区血管密度。结果正确构建了重组质粒pSecTag-VEGF和pSecTag-Ang1,并能在HEK293细胞中特异地表达出VEGF165和Ang1。同对照组相比,治疗后1周实验组左心室收缩压(LVSP)从(34.15±5.78)mmHg(1mmHg=0.133kPa)升高到(39.33±6.10)mmHg;左心室舒张末压(LVEDP)从(15.85±1.79)mmHg降低到(9.09±1.98)mmHg(P<0.05);左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)从(1413.52±417.73)mmHg/s升高到(1939.28±710.22)mmHg/s;左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)从(600.39±55.59)mmHg/s升高到(1030.53±401.22)mmHg/s(P<0.05);左心室做功(LVW)从(8213.88±303.68)mmHg/min升高到(15416.67±233.43)mmHg/min(P<0.05);冠状动脉流量(CF)从(3.2±0.31)mL/min升高到(4.09±0.80)mL/min(P<0.05),心肌注射区毛细血管数分别从(25±5)条/mm2增加到(46±8)条/mm2(P<0.05)。结论VEGF_(165)和Ang1基因导入能增强缺血心肌的血管新生和侧支循环的形成,改善心功能。 相似文献
5.
目的 研究G蛋白βγ亚基在心肌细胞肥大中的作用.方法 采用细菌内同源重组方法制备重组腺病毒载体rAd-βARKct 50 MOI(multiplicity of infection)感染经去甲肾上腺素处理肥大乳鼠心肌细胞,荧光倒置显微镜下观察心肌细胞形态及绿色荧光蛋白的表达,EMAIL图像分析软件测定心肌细胞的表面积,RT-PCR检测βARKct、α-MHC和β-MHC的mRNA表达水平.结果 经测序鉴定证实rAd-β ARKct构建成功,对心肌细胞的感染率40%~50%,与去甲肾上腺素组相比,重组腺病毒组α-MHC定量比值显著上升,β-MHC定量比值显著降低.结论 编码βARKct的重组腺病毒表达载体可以体外感染乳鼠心肌细胞并在心肌细胞中表达βARKct;抑制Gβγ蛋白的功能,可显著逆转去甲肾上腺素介导的肌球蛋白重链表型的改变(α-MHC/β-MHC),逆转心肌细胞肥大. 相似文献
6.
卡维地洛对急性心肌梗死大鼠心功能的保护作用 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:探讨卡维地洛对急性心肌梗死(AMI)后Sprague-Dawley大鼠心功能的保护作用.方法:用手术结扎左冠脉前降支法,制备50只大鼠AMI模型,随机分为生理盐水组[0.9%NaCl,2 mL/(kg·d)]、福辛普利治疗对照组[3.0mg/(kg·d)]、卡维地洛3治疗组[1.5、3.0、6.0mg/(kg·d)],连续给药4周;另设正常组和假结扎组.进行体重、心率、超声心动图和血浆生化等指标检测.结果:与生理盐水组比较,中、高剂量治疗组大鼠的心率明显降低(P<0.01);超声心动图示EF和FS、IVSd、IVSs均明显增加(P<0.01),LVIDd和LVIDs显著降低(P<0.05);离体心功能示CF、LVSP、LVDP和±dp/dtmax 均增加,LVEDP则明显减小(P<0.01);血清中MDA明显降低,而NO、SOD、GSH-PX均增高(P<0.01).结论:卡维地洛能很好地改善AMI后大鼠的心功能,抑制心室的重枸作用. 相似文献
7.
编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct. 相似文献
8.
目的:扩增、克隆人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组MIF蛋白。方法:根据人MIF基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术从人T淋巴细胞mRNA中扩增MIF基因。将MIF定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,并将构建正确的重组表达载体pGEX-4T-MIF转化工程菌BL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)诱导表达重组MIF蛋白。用GSTrap亲合柱纯化表达产物GST-MIF,行柱上凝血酶消化,洗脱获得MIF蛋白。用巨噬细胞移动抑制试验(MMI)鉴定MIF蛋白的生物活性。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果表明,成功构建了重组质粒pGEX-4T-MIF,人MIF cDNA长348 bp,编码115个氨基酸。经IPTG诱导,高效表达出可溶的GST-MIF蛋白。SDS-PAGE 和 Western blotting分析显示,GST-MIF经凝血酶消化,获得13 kU的MIF蛋白。MIF蛋白对巨噬细胞移动的抑制率达30%,具有生物活性。结论:克隆、测定了人MIF基因,在大肠杆菌表达出具有生物活性的MIF蛋白。 相似文献
9.
目的探讨不同剂量卡维地洛治疗急性心肌梗死后大鼠心肌炎症因子和心肌基质金属蛋白酶表达与心功能的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死(AMI)模型共48只,随机分为卡维地洛低剂量治疗组(CAR-L组,2.5 mg·kg-1·d-1)、卡维地洛中剂量治疗组(CAR-M组,5.0 mg·kg-1·d-1)、卡维地洛高剂量治疗组(CAR-H组,10.0 mg·kg-1·d-1)和心肌梗死对照组(AMI组),每组12只;另设假结扎组(Sham组,12只)。连续灌胃治疗4周后,检测各组血浆炎症因子(IL-6、TNF-α、MIF)和心肌基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9水平以及超声心动图测试左室心功能。结果同Sham组比较,AMI组的组织促炎症因子IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显增高(P<0.01),左室射血分数EF和FS%明显降低(P<0.01)。同AMI组比较,卡维地洛治疗组的IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显降低(P<0.01),而且EF和FS%值明显增高(P<0.05),特别是CAR-M组和CAR-H组治疗效果更加明显。并且CAR-M组和CAR-H组的各项检测指标与Sham组无显著性差异(P>0.05)。结论中、高剂量卡维地洛不但可显著减少心肌梗死大鼠的促炎因子的表达,还能够明显降低心肌基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制左心室重构,改善心功能。 相似文献
10.
目的比较不同剂量吲达帕胺(Ind)和替米沙坦(Tel)联用对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用及对心功能的影响。方法40只SHR随机分为5组:①空白对照组;②低-低剂量组:Ind 0.06 mg/kg.d-1,Tel 3.57 mg/kg.d-1;③低-高剂量组:Ind 0.06 mg/kg.d-1,Tel 7.14 mg/kg.d-1;④高-低剂量组:Ind 0.12 mg/kg.d-1,Tel 3.57 mg/kg.d-1;⑤高剂量单用组:Tel 7.14 mg/kg.d-1,灌胃给药,连续给药4周,尾袖法测收缩压,Langendorff灌流心脏测量心功能。结果低-低剂量联用组,能有效降低SHR的收缩压,降低左室舒张末期压,减少左室重与体质量之比。结论小剂量联合应用吲达帕胺和替米沙坦对SHR的降压作用及心功能的改善与大剂量单用替米沙坦的疗效一致。 相似文献