中药逆转肿瘤细胞多药耐药研究进展

阐述了肿瘤多药耐药（MDR）是临床化疗失败的主要原因之一,己成为恶性肿瘤化疗过程急需解决的问题。中药有毒性小、安全有效、多靶点等优势,在逆转肿瘤MDR的研究中正受到越来越广泛的关注。中药通过作用于介导MDR形成的膜转运系统、药物代谢系统、促进肿瘤细胞凋亡等机制,对多种肿瘤的MDR具有逆转作用。如何有效地从浩淼庞大的中药资源库中快速筛选并定位到具有逆转MDR活性的分子仍是目前中药研发亟待解决的瓶颈问题之一。建立科学合理的抗肿瘤药物筛选模型和高效可靠的方法和系统,能够满足现代医学的科学阐述要求,又能兼顾中医药本身的整体观念和辨证论治的思想,还需要大量艰苦的科学工作。     

基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶选择性多肽抑制剂HQ1～HQ4对内毒素休克的保护作用的研究

基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶在内毒素休克中都扮演重要角色。前期研究发现,同时抑制这两种酶的多肽抑制剂可保护内毒素休克小鼠。该研究合成多肽文库,筛选出了对基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶有选择性抑制活力的多肽抑制剂。在此基础上,建立了体外检测酶活力的模型,并比较了多肽抑制剂HQ 1～HQ4对中性粒细胞颗粒释放物中基质金属蛋白酶-9活力的抑制作用,发现5μmol/L的4种多肽抑制剂对基质金属蛋白酶-9酶活力的抑制率分别是79%,80%,43%和63%。同时建立了内毒素休克模型并考察了几种多肽抑制剂的体内活性,发现注射HQ1和HQ4组小鼠的生存率分别为50%和58.3%,而注射HQ2和HQ3组小鼠生存率仅为16.7%。这些结果证明了在该模型中,抑制基质金属蛋白酶具有更好的保护作用。这些工作使我们对内毒素休克模型的发病机理的认识又深入了一步。     

叶酸受体α与卵巢肿瘤

卵巢肿瘤的死亡率为妇科肿瘤之首,积极探索早期卵巢癌的筛查方法和新型治疗药物,对降低死亡率具有重要意义。叶酸受体α(FRα),对叶酸具有高度亲和性。在生理情况下,叶酸受体α仅低度表达于少数正常组织细胞,而在多种人类上皮源性肿瘤中,尤其是卵巢肿瘤中,都可以检测到高水平表达的叶酸受体α。卵巢上皮癌中有90%以上可见叶酸受体α的高表达,其在卵巢肿瘤中的表达水平可高于正常10～100倍。更为重要的是,叶酸受体α在早期卵巢肿瘤中有很高的阳性率。叶酸受体α为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原,可以作为卵巢肿瘤早期诊断标志物,以及卵巢肿瘤被动免疫治疗的靶点。     

六氟异丙醇在难溶性多肽圆二色谱检测中的应用

二级结构是多肽药物发挥药理活性的重要基础,圆二色谱法是测定多肽二级结构最常用的方法,但一些难溶性多肽在检测中往往会遇到溶解度低和溶剂吸收干扰等困难。为了解决难溶性多肽在圆二色谱测定中溶剂选择的困难,文章从溶剂特性及原理出发,提出使用六氟异丙醇作为难溶性多肽的圆二色谱溶剂,并通过对多肽在纯六氟异丙醇及其与PBS混合溶剂的溶解实验和圆二色谱检测,验证了难溶性多肽在上述溶剂中溶解度较高,溶液均一且透明。CD图谱中多肽二级结构特征峰显著、稳定、结构信息充足,且未产生明显的溶剂吸收干扰。这些结果证明了六氟异丙醇可以作为难溶性多肽的良好溶剂,为其圆二色谱检测提供一种新的溶剂选择。     

噬菌体展示随机十五肽库的构建

为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编码随机十五肽的基因。将扩增后的目的基因经过Sfi Ι,Not Ι两个限制性内切酶双酶切后,与经同样双酶切的5′去磷酸化的噬菌粒载体连接,将重组产物电转入大肠埃希菌TG1感受态细胞。集合菌落后进行库容和多样性检验。所建肽库库容可达5×10⁸。随机挑取20个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机十五肽库。     

噬菌体展示技术与中药活性成分靶点蛋白筛选研究

噬菌体展示技术是将所需多肽/蛋白从大量变异体的集落中提取出来的一种高通量的体外筛选技术,因其高效、实用、便捷的优势现已广泛应用于药物研发的多方面领域,在中药活性成分靶点蛋白中也有越来越广泛的应用。靶点蛋白是药物分子在体内的结合位点,良好的靶点是获得优良药物的基础。该文综述了噬菌体展示技术的研究进展及其在中药活性分子靶点蛋白筛选中的应用。