微生物酶的方法提高红景天苷和酪醇的研究

目的 通过酶学方法短时间内提高红景天苷和酪醇的含量.方法 微生物固体和液体发酵法,通过硫酸铵沉淀法从黑曲霉H35和H42的发酵液中提取合成红景天苷和酪醇的红景天苷合成酶系和酪醇合成酶系.通过酶促反应提高红景天苷和酪醇的含量.结果 通过酶学的方法使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了194.2%和83.8%.通过两种酶的协调作用使得红景天苷和酪醇的含量分别提高了139.9%和191.1 %.酪醇合成酶的最适反应pH和温度分别为5.5℃和40℃;红景天苷合成酶的最适反应pH和温度分别为5.0℃和45℃.酪醇合成酶在pH4～6.5温度低于65℃有较好稳定性;红景天苷合成酶在pR3.5～6.5温度低于60℃下具有较好的稳定性.结论 酶学方法可以在短期间内将红景天苷和酪醇的含量提高139.9%和191.1%,具有较高的实用经济效益.     

HPLC法同时测定龙胆泻肝丸中10个成分的含量

目的:建立HPLC法测定龙胆泻肝丸中的栀子苷、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、藏红花素A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸、汉黄芩素、马兜铃酸A的含量。方法:采用Agilent Extend-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:含0.1%甲酸的乙腈溶液(A)-0.1%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0～5 min,5%～20%A;5～10 min,20%A;10～25 min,20%～30%A;25～40 min,30%～50%A;40～50 min,50%～70%A);流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:254 nm;进样量:10μL。结果:栀子苷、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、藏红花素A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸、汉黄芩素、马兜铃酸A在相应浓度范围内线性关系良好(r~20.999);日内、日间精密度的RSD值均≤0.99%;24 h内各成分色谱峰面积RSD1.5%,稳定性良好;重复性试验结果显示,各成分含量RSD值均1.5%。样品未检测出马兜铃酸A,其他各成分在各批次龙胆泻肝丸中的含量差异较小。结论:该方法准确、可靠,利于龙胆泻肝丸的质量控制及后续质量标准的提高。     

细胞融合构建红景天苷高转化菌株及固态发酵工艺优化

目的 构建红景天苷高转化菌株,并对红景天的固态发酵工艺进行优化.方法 以黑曲霉菌株H35和H42为出发菌株,将双亲株的原生质体分别进行紫外和热灭活后进行原生质体融合,通过重氮盐比色法初筛和HPLC复筛得到一融合菌株(Rc14);并运用"复杂定向调控技术"对红景天固态发酵工艺进行优化.结果 在最佳固态发酵工艺条件下,Rc14发酵后红景天苷含量比发酵前提高140%,酪醇含量提高277%,总有效成分含量增加了176%.结论 利用融合菌株Rc14固态发酵红景天的工艺在红景天的工业生产中具有很高的应用价值.     

双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究

目的 从已分离的具有红景天苷转化能力的霉菌中,筛选能协同发酵红景天苷的双菌株组合.方法 以重氮盐比色法初步确定菌株组合和双菌株协同主要发酵条件,并用高效液相色谱(HPLC)法复筛.结果 选出的最优双菌株组合编号为35-42,该组合在最优发酵条件下,发酵后红景天中红景天苷和酪醇含量比原药材分别提高86.29%和118.14%,总有效成分提高94.68%.结论 表明双菌株的协同转化作用明显优于单菌株.