日本七鳃鳗IL-17基因原核表达、蛋白纯化及多抗制备与鉴定

目的从日本七鳃鳗(Lampetra japonica,Lj)类淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗IL-17基因,并对其氨基酸序列进行分析。方法将IL-17基因连接到原核表达载体pET-28a上,成功构建了重组表达质粒pET-28a-Lj-IL-17;经IPTG诱导表达并纯化重组Lj-IL-17蛋白。用重组Lj-IL-17蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体进行ELISA与Western blot检测。结果经ELISA检测抗体效价为1∶512 000,Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性结合重组和天然IL-17蛋白。流式细胞实验证明该多抗能特异识别七鳃鳗类淋巴细胞表达的IL-17分子。结论重组Lj-IL-17蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为研究日本七鳃鳗适应性免疫起源与进化提供了重要的工具。     

B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究

目的克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western blot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清。利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的蛋白。Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上。兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1∶256 000。免疫荧光染色结果显示Raji细胞中Pax5高表达。结论本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据。     

E2A、EBF和PAX5在早期B细胞分化发育中的作用

早期B细胞分化发育受到各种转录因子调控,特别是转录因子E2A、早期B细胞因子(EBF)及PAX5的调控尤为重要。本文以E2A、EBF与PAX5三个转录因子为综述对象,逐一阐述其在早期B细胞分化发育中的作用,并对3个转录因子在早期B细胞分化发育中的协同作用进行了综述。本文将为"B淋巴细胞分化发育调控机理研究"提供参考。     

Pax5对B细胞分化发育调控作用的研究进展

转录因子Pax5在B细胞定向分化发育过程中发挥重要调控作用。B细胞定向分化发育相关的转录因子如PU.1、干扰素调节因子4(Interferon regulatory factor 4,IRF4)、IRF8和NF-κB结合在Pax5基因5’上游增强子区,转录因子EBF、STAT5结合在Pax5基因5’上游启动子区,从而共同促进Pax5基因的表达。表达的Pax5蛋白不仅通过IgH的V(D)J片段染色质的甲基化和乙酰化修饰来调节IgH V(D)J重排,并且通过B细胞特异性基因(mb-1、VpreB、λ5、CD19、BLNK等)表达调控B细胞的定向分化发育。若Pax5基因缺失,影响组蛋白H3-K9的修饰,导致B细胞向非B细胞分化。总之,Pax5在B细胞定向分化发育中起到重要调控作用。     

Kv1.3通道阻滞剂与T、B淋巴细胞介导的自身免疫疾病

T、B淋巴细胞在免疫调节过程中扮演重要作用。当免疫系统调控出现紊乱时则会导致自身免疫等疾病的发生,已证实Kv1.3通道在T、B淋巴细胞亚型中表达数量的变化与此类疾病的发生一定的联系。特异性的Kv1.3通道阻滞剂是以Kv1.3通道为靶点并与Kv1.3通道结合,调节在淋巴细胞增殖中的细胞因子及相关的信号通路来遏制自身免疫疾病的发展。与传统的治疗此类疾病的方法相比有着其独特的优势,如较强特异性,较少的副作用等。这些发现对于深入研究自身免疫疾病的病理机制、早期诊断及新型药物的发现具有深远的意义。     

荨麻提取物对5α-还原酶抑制活性的研究

目的 研究荨麻提取物中水溶性成分的5a-还原酶抑制活性.方法 基于荧光测定的方法,建立一种5a-还原酶抑制剂体外模型,从大鼠前列腺组织中提取5α-还原粗酶,与底物睾酮(Testosterone)以及供氢体还原型辅酶Ⅱ(NADPH)共同组成了一种微量反应体系.利用荧光测定仪检测NADPH的含量,以荧光的强弱来判断5a-还原酶的活性,以非那雄胺作为阳性对照.结果 同对照组相比,反应体系中加入荨麻提取物后荧光值有显著升高.结论 荨麻根的水溶性成分在体外能够抑制5a-还原酶的活性.     

高迁移率族蛋白B1及其信号分子作用研究进展

HMGB1是HMGB亚家族成员之一。早期研究显示,HMGB1是一种DNA结合蛋白,通过与多种转录因子、复制蛋白、甾体受体及RAG1重组酶作用,参与DNA重组、修复、基因转录调控,细胞复制和分化成熟等多种生命活动。随着研究的深入,人们对HMGB1有了丰富的认识,包括其基因和分子结构、蛋白的合成和分泌、翻译后修饰、作用的靶细胞表面受体和胞内的信号传递通路、靶细胞活化后释放的炎症介质和由此导致的相关疾病、以及靶向治