circRNA 404524在PM_(2.5)致BEAS-2B细胞炎症过程中的功能及机制研究

目的研究circRNA 404524在PM_(2.5)致永生化人支气管上皮样细胞(BEAS-2B)炎症过程中表达改变,探索circRNA在PM_(2.5)致气道炎症过程中的功能及机制。方法 BEAS-2B细胞分为6组:NT组(DMSO),PM_(2.5)组(75μg/ml PM_(2.5)),NC组(转染空载体质粒+DMSO),NC+PM_(2.5)组(转染空载体质粒+75μg/ml PM_(2.5)),OE组(转染circRNA 404524+DMSO),OE+PM_(2.5)组(转染circRNA 404524+75μg/ml PM_(2.5))。使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测circRNA 404524在75μg/ml PM_(2.5)染毒BEAS-2B细胞中的表达水平,同时通过转染circRNA 404524的过表达载体联合75μg/ml PM_(2.5)染毒后检测circRNA404524、IL-6及IL-8的表达水平。检测circRNA 404524在BEAS-2B细胞胞浆/胞核的表达水平,分析其表达位置。通过KEGG生物信息学软件分析circRNA 404524可能参与调控的基因通路,而后检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平。结果与NT组相比,circRNA 404524在PM_(2.5)组表达下调,相对变化倍数为2.63,差异有统计学意义(P0.01)。转染circRNA 404524过表达载体后,通过检测发现,相比于NC组,OE组中circRNA 404524上调154.74倍,差异有统计学意义(P0.01)。检测炎症因子表达水平发现,与NC组相比,OE组中IL-6及IL-8表达均下调,差异均具有统计学意义(P0.05),NC+PM_(2.5)组中IL-6和IL-8表达均上调,差异均具有统计学意义(P0.01)。胞浆胞核定位结果显示circRNA 404524主要在胞核表达,检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平发现,相比于NC组,OE组中IKK-alpha、IKB-alpha及NFKB1表达均下调,NC+PM_(2.5)组中表达均上调,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 circRNA 404524在PM_(2.5)染毒的BEAS-2B细胞中低表达,将其过表达后,PM_(2.5)引起的炎症水平降低,提示其在PM_(2.5)染毒致BEAS-2B细胞炎症过程中发挥抑炎基因的作用,并可能通过对NF-κB炎症通路的调控发挥功能。     

5-氮杂胞苷诱导大鼠心脏成纤维细胞向心肌样细胞分化进程相关基因的表达差异

目的 探讨5-氮杂胞苷（5-aza）诱导心脏成纤维细胞（CFs）向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异。方法 新生1～3 d SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs,采用CFs分子标记盘状结构域受体2（DDR2）并行细胞免疫荧光染色。含15 μmol/L 5-aza心肌细胞诱导液培养第3代CFs, Real-time PCR检测心肌化诱导不同时间点相关基因vimentin、DDR2、Nanog、sox2、c-kit、sca-1、Tbx5、CD73、CD34、cMyc、klf4、Gata4、Oct4、Mef2c和心肌肌钙蛋白T（cTnT）的表达差异,细胞免疫荧光检测心肌化诱导后5 d、7 d、14 d、21 d和28 d肌钙蛋白T（cTnT）的表达。透射电子显微镜观察心肌化诱导28 d CFs的超微结构变化。结果 5-aza诱导CFs后3 d 细胞生长速率减慢,部分细胞由三角形、梭形向圆形和杆状转变。诱导后7 d、14 d、21 d 和28 d,与诱导前相比,DDR2表达稳定,vimentin在14 d表达下降,Nanog、c-kit、sox2和Tbx5伴随着心肌化进程呈现表达下降趋势,而CD73、Mef2c、CD34、Gata4、Oct4和cTnT表达逐步增加,sca-1在7 d 表达上升又下降,cMyc和klf4在14 d表达上升又下降。诱导后 5 d少量细胞表达cTnT,14～21 d cTnT阳性细胞数明显增高,28 d表达cTnT较多且趋于稳定。透射电子显微镜显示,CFs心肌化诱导28 d,细胞与细胞间出现端-端连接,细胞质内出现大量的肌原纤维,排列较为规律,但肌节不明显,H带、Z线和M线显示不清。结论 CFs经5-aza诱导,可向心肌样细胞分化,但不能形成成熟的心肌细胞。     

心脏成纤维细胞生物表型多样性

目的 探讨心脏成纤维细胞（CFs）生物表型多样性。方法 新生1～3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白（vimentin）、成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1）和盘状结构域受体（DDR2）的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。 结果 酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog⁺ /CD73⁺共表达阳性率最高（59.02%±8.39%）,与其他3组相比差异均有极显著性（P<0.01）;而 nanog⁺ /CD90⁺共表达阳性率与nanog⁺ /sca-1⁺之间差异无显著性（P>0.05）,但这两组与CD90⁺ /sca-1⁺相比差异均有极显著性（P<0.01）;CD90⁺ /sca-1⁺共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义（P<0.01）。 结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。     

应用鸡胚活体电转GFP示踪技术观察脊髓左右两侧神经元纤维投射

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每次脉冲60 ms,间隔100 ms,电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6小时开始到10天,分别收集胚胎,甲醛固定冰冻切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化。结果:电转后6小时便可以观察到GFP的表达,24小时后可以看到GFP标记细胞纤维的投射,3天可以清晰的观察到转入GFP一侧脊髓的运动神经元纤维束投射到另外一侧脊髓。结论:电转GFP成功标记运动神经元纤维在脊髓左右两侧的投射。     

浅析我院门诊药房的药学服务

药学服务以患者方便、安全、满意为标准,通过药品调剂、用药咨询和用药指导,为患者提供药学知识和信息。药学服务可以达到减少药害、提高药物治疗质量、节省医药资源、降低医疗费用的积极效果。其具有高度专业性和技术性,包括药物咨询、指导合理用药、不良反应收集等。本文结合药师在门诊药房的具体工作实践,从门诊药房窗口药学服务的常见问题及应对措施,探讨如何做好门诊药房药学服务工作,以便我们更好地为患者服务。     

小鼠胚胎发育过程中N-Cadherin异常表达对大脑皮层神经元迁移的影响

目的:探究N-Cadhetin异常表达对小鼠大脑皮层发育过程中神经元迁移的影响.方法:通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,荧光免疫组化检测超表达结果,用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征.结果:与对照组相比,N-Cadherin超表达后有更多的GFP阳性神经元迁移到皮层的Ⅱ-Ⅳ层;N-Cadherin被抑制后大量GFP阳性神经元停滞在SVZ区.结论:N-Cadherin在小鼠大脑皮层发育过程中对神经元的迁移具有影响作用.     

生物功能性全口义齿修复治疗无牙颌患者的临床效果

目的 探讨生物功能性全口义齿修复治疗无牙颌患者临床效果及安全性。方法 将80例在我院行无牙颌义齿修复治疗的患者随机分别采用传统常规全口义齿修复与生物功能性全口义齿修复。由同一组口腔科医师取模并进行3次复诊,分别行托盘试戴、蜡型试戴、义齿试戴。对患者常规全口义齿试戴、生物功能性全口义齿试戴2周后进行义齿固位力测试、咀嚼效率测试、义齿满意度测评。按照所佩戴的全口义齿分为常规全口义齿组和生物功能性全口义齿组,对上述佩戴指标进行测评并比较。结果 无牙颌患者佩戴常规全口义齿时上颌与下颌固位力均明显小于佩戴生物功能性全口义齿的固位力,差异有统计学意义(P<0.05);无牙颌患者佩戴常规全口义齿时咀嚼30次色调值明显高于佩戴生物功能性全口义齿,差异有统计学意义(P<0.05);患者配电生物功能性全口义齿的佩戴满意度的各项评分均明显高于常规全口义齿佩戴时的各项评分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 生物功能性全口义齿修复治疗无牙颌患者相较于常规全口义齿修复,可显著提升上、下颌固位力及咀嚼效率,患者获得更优的佩戴满意度。     

circRNA002144在PM_(2.5)诱导人正常支气管上皮细胞炎性反应中的机制研究

目的研究circRNA002144在PM_(2.5)暴露人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的表达及其下游靶基因的差异表达情况,并探讨circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能的调控机制。方法分别以0、30、60、90、120、150μg/ml的PM_(2.5)暴露BEAS-2B细胞48 h,收集细胞上清液用酶联免疫(ELISA)实验检测白细胞介素-6(IL-6)的分泌量;收集细胞,以Trizol试剂裂解细胞后提取总RNA,以实时定量PCR(q RT-PCR)检测不同浓度PM_(2.5)染毒BEAS-2B细胞中circRNA002144表达水平的变化;然后利用RegRNA和Target Scan预测与circRNA002144相互作用的miRNAs以及靶向的下游mRNA,选择炎症相关的mRNA进一步检测。结果与对照组相比,不同浓度的PM_(2.5)染毒组BEAS-2B细胞炎性细胞因子IL-6的表达均升高,且有剂量依赖关系;circRNA002144的表达水平均升高,且随着PM_(2.5)染毒浓度的增加呈高表达,在120μg/ml染毒组,相对表达量增高4.79倍,差异均有统计学意义(P0.01);结合生物信息学预测分析和q RT-PCR检测发现,相比于对照组,与circRNA002144相互作用的hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p在PM_(2.5)染毒组细胞呈现低表达的趋势,这两个miRNAs共同靶向的STAT3则呈现高表达,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 circRNA002144在PM_(2.5)诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能发挥促炎的作用,可能通过下调hsa-mi R-608和hsa-mi R-92a-2-5p促进IL-6分泌,进而激活STAT3炎症通路。     

一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射研究方法的建立

目的建立一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。方法采用鸡胚带壳开窗培养技术,在鸡胚胚龄3d(E3),通过活体电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到脊髓腔进行定时定位活体电转,转染后3d在体视荧光显微镜下进行观察;取出GFP阳性表达的胚胎,剥离出脊髓,从顶板处破开之后将脊髓展开,用4%多聚甲醛固定1h后,对神经钙黏蛋白(N-cadherin)进行免疫荧光染色,用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染细胞核;封片后在荧光显微镜下观察神经纤维投射情况。结果对比横向切片和脊髓展开标本,两者均观察到GFP阳性转染侧的神经元纤维穿过底板沿对侧脊髓白质区边缘投射到神经结节,在脊髓展开标本中还可观察到神经纤维穿过底板再纵向向脑部投射;而N-cadherin免疫荧光染色结果表明,GFP基因的转染对机体正常的发育无明显影响。结论本实验建立了一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。     

参附黄蒲汤与黄芪建中汤治疗胃痛的比较研究

〔摘 要〕 目的：比较参附黄蒲汤和黄芪建中汤在脾胃虚寒证胃痛患者治疗中的临床效果。方法：选择解放军联勤保障部队 第990医院2018年7月至2020年10月期间收治的88例脾胃虚寒证胃痛患者,按随机数字表法分为对照组与观察组,各44例。 两组入院后均给予对症治疗,对照组给予黄芪建中汤,观察组给予参附黄蒲汤。比较两组患者临床疗效、治疗前后中医 证候积分、不良反应。结果：观察组患者治疗总有效率为 97.73 %,高于对照组的 81.82 %,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）; 治疗前两组患者的各项中医证候积分比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）;治疗后观察组患者的各项中医证候积分低于 对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。两组患者治疗期间均未出现明显不良反应。结论：与黄芪建中汤治疗相比, 参附黄蒲汤在脾胃虚寒证胃痛治疗中疗效确切,能够有效改善各临床症状,无明显不良反应,安全可靠。