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微生物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂N98-1021A的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究分别以丁酰硫代胆碱和二硫二硝基苯甲酸为底物和显色剂 ,建立了一种准确、快速的高通量筛选微生物代谢产物来源的抑制剂的体外筛选模型。利用此方法从 2 14 1株放线菌中筛选到一株阳性菌株N98 10 2 1,该菌株的发酵液经有机溶剂提取、ODS柱层析及HPLC制备分离 ,得到一个活性化合物N98 10 2 1A ,该化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50 为 2 0 μmol/L ,经酶抑制动力学分析 ,该化合物为乙酰胆碱酯酶的非竞争性可逆抑制剂。通过对该化合物的紫外、红外、质谱、核磁等理化分析 ,得知该化合物与terferol结构相同。但该化合物对乙酰胆碱脂酶的抑制活性至今未见报道。 相似文献
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遗传工程的基础理论和专门技术的研究,目前在世界各国都受到重视。虽然目前以遗传工程技术制造的产品还没有大量投放市场,但遗传工程的专门技术已经作为商品出售。有人估计,到80年代中期或后期,以遗传工程技术制造的干扰素、胰岛素、人体生长激素将大量投放市场。在微生物领域里,首先是细菌、酵母、真菌的深入研究,给放线菌(特别是链霉菌)的研究工作者以极大的启发,但是象以大肠杆菌作为宿主组入DNA的方法用于放线菌是不合适的。一方面是由于细胞结构的差异,同时细菌产生的氨基酸、干扰素、胰岛素等 相似文献
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糖多孢红霉菌表达载体pZMW的构建 总被引:8,自引:5,他引:3
目的:构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法:用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子,并利用pSET152质粒上链霉菌染色体整合位点(attP)和安普霉素抗性基因,构建了染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZW。结果:pZMW表达载体能够整合到链霉菌和糖多孢红霉菌染色体上,并能够在链霉菌和糖多孢红霉菌体内表达硫链丝菌素抗性基因tsr。结论:pZMW表达载体能够在糖多孢红霉菌中表达外源基因。 相似文献
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目的:研究用TF-1细胞测定rhGM-CSF(重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子)生物学活性的方法并用WHO rhGM-CSF国际标准品进行工作标准品和对照品(生白能先灵产品)的联合标定。方法:采用 MTT染色法。结果:首次将(4,4)法引入rhGM-CSF生物活性的测定,使所标定的工作标准品生物效价为每瓶1.37×106 IU,所标定的对照品生物效价为每瓶1.79×106IU,效价的平均可信限率分别为 4. 904%和 4. 333%。结论:(4, 4)法可用于rhGM-CSF生物活性的测定,结果便于统计分析。所标定的工作标准品可作为rhGM-CSF生物活性测定的工作标准。 相似文献
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产生大环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究 总被引:11,自引:4,他引:11
目的 建立一套简便、快速、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台;认识PKS—I基因在不同环境放线菌群中的分布规律,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法 通过对大环聚酮类化合物生物合成途径所用的I型聚酮合成酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析,设计了一对引物用于扩增KS/AT功能域约1.6kb目的基因片段,依据放线菌基因组中I型PKS合成酶基因的存在与否标定可能的大环聚酮类天然产物产生菌。结果 利用建立的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对98株嗜碱放线菌、99株链霉菌、46株嗜盐放线菌和757株稀有放线菌进行了筛选,研究表明嗜碱放线菌、链霉菌、嗜盐放线菌和稀有放线菌I型聚酮合成酶基因的阳性率分别为26.5%、20.4%、15.2%和9.35%。结论 利用组合放线菌基因组DNA快速提取技术和PKS—I基因兼并引物PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的大环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系;并对不同环境条件的放线菌菌群的PKS—I基因分布进行了研究,结果 不仅表明了放线菌PKS I聚酮合成酶分布的广泛性,而且表明极端环境放线菌,尤其是嗜碱放线菌是大环聚酮类化合物潜在的丰富资源,为新药筛选有效菌源的确定提供了可靠依据。 相似文献
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构建了hG-CSF大肠杆菌融合分泌表达载体pSEGF,利用该系统可直接将hG-CSF融合蛋白分泌到培养基中,重组蛋白具有高度的可溶性,并具生物学活性。在该系统中,外源蛋白N端融合了金黄色葡萄球菌蛋白AIgG结合区,由lac启动子与金黄色葡萄球菌蛋白A启动子控制表达,信号肽选用金黄色葡萄球菌蛋白A的信号肽序列。在融合头与目的蛋之间设计了蛋白酶识别位点,可用Factor Xa蛋白酶特异切割,得到与天然氨基酸序列完全相同的重组hG-CSF蛋白。该系统的构建成功,为简化下游纯化工艺,提高收率带来可能。 相似文献
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大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中应用的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题:聚酮合成酶中ACP的后修饰、6-dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等。通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp,使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰;6-dEB生物合成前体丙酰CoA和丙二酰CoA可通过Pfeifer途径和Dayem途径提供;目前,在大肠杆菌体内已可以合成6-dEB。利用大肠杆菌系统合成新的大环内酯化合物、对大环内酯糖基化修饰和提高大肠杆菌系统合成大环内酯类抗生素产量将是今后研究的重点。 相似文献
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新抗生素的筛选工作已广泛开展近30年,但目前用随机筛选法发现新抗生素的可能性已下降,需要研究能有效发现新抗生素的新途径。筛选新抗生素应当考虑三个主要因素,即鉴别方法、微生物产生菌和培养方法。培养方法为的是定量或定性地获得各种发酵产物,然而这一因素在筛选中通常不够重视。作者认为通过改变培养基的成分或培养条件,既能增加微量抗生素组分,又有可能发现新的抗生素。营养期和分泌期:Doskocil 等研究了丝裂链霉菌的生长,DNA 和RNA 的合成、呼吸、形 相似文献
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耐药性微生物与医院的许多致命感染以及严重危及生命的几种流行病有关。因而了解耐药性的机理是解决这一问题的重要途径。耐药性机理通常有三个方面:(1)改变靶作用位点;(2)改变通透性;(3)酶促药物失活。近年由于采用重组DNA 技术,已可较容易地在分子水平上阐明细菌耐药性及其调节机理的许多方面。 相似文献
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