微小RNA在白血病中的作用及治疗策略

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类由19～25个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子RNA,其在白血病中扮演着癌基因和抑癌基因的角色,针对miRNA在白血病中的不同作用,可采取相应的治疗策略。对于在白血病中高表达的具有癌基因功能的miRNA,可采用反义寡核苷酸等技术下调或抑制miRNA;而对于在白血病中显著低表达、发挥着抑癌基因作用的miRNA,可采用基因治疗的方法,导入相应的外源miRNA,使其正常表达。因此,miRNA对于白血病的基因治疗或作为白血病治疗的新靶标具有广阔的应用前景。     

靶向抑制微小RNA-21提高白血病细胞对三氧化二砷的敏感性研究

目的 探讨以微小RNA 21(microRNA 21, miRNA 21)为靶标的反义核酸(AMO miR 21)提高白血病K562细胞对三氧化二砷（As2O3）的敏感性及可能的作用机制。方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染K562细胞。MTT法检测单独使用AMO-miR-21、As2O3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制作用,并计算抑制率和IC50;PI单染检测细胞周期及凋亡;实时定量PCR检测miRNA-21表达水平的改变;免疫荧光法检测miRNA 21候选靶基因PDCD4蛋白表达的改变。结果 AMO-miR-21与As2O3联合使用后,IC50从2.10 μmol/L降低到1.23 μmol/L,敏感性提高到单用As2O3的1.78倍;AMO-miR-21联合As2O3组细胞凋亡明显增加（P<0.05）;单独转染AMO-miR-21可显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平（P<0.01),同时抑癌基因PDCD4蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 AMO-miR-21与As2O3联合使用可提高K562细胞对As2O3的敏感性,为白血病的治疗提供了新的方法。AMO-miR-21通过靶向抑制miRNA-21,进而上调抑癌基因PDCD4的表达而发挥抗肿瘤作用。     

微小RNA在白血病中的作用及治疗策略

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类由19～25个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子RNA.其在白血病中扮演着癌基因和抑癌基因的角色,针对miRNA在自血病中的不同作用,可采取相应的治疗策略.对于在白血病中高表达的具有癌基因功能的miRNA,可采用反义寡核苷酸等技术下调或抑制miRNA:而对于在白血病中显...     

尼克酰胺对人脐带间充质干细胞的保护效应

目的:探讨尼克酰胺(nicotinic acid amide,NAA)减轻人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)输注损伤的效应。方法:空白对照组为0.3 m L生理盐水、MSC组为0.3 m L 1×106CFSE标记的h UC-MSCs,MSC+NAA组为0.3 m L 10 mmol/L NAA处理24 h的1×106CFSE标记的h UC-MSCs,分别与2.7 m L正常人全血混匀,注入改良Chandler Loop内,在37℃下,20 m L/min循环1 h,检测循环前后血小板、白细胞、h UC-MSCs和C3a的变化。结果:血小板消耗率空白对照组为(29.96±10.88)%、MSC组为(77.76±19.29)%、MSC+NAA组为(50.13±18.10)%;白细胞消耗率空白对照组为(37.82±13.81)%、MSC组为(64.57±17.08)%、MSC+NAA组为(41.52±17.26)%,MSC组和MSC+NAA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。MSC+NAA组的h UC-MSCs存活率较MSC组高(P0.05)。空白对照、MSC和MSC+NAA组的C3a含量分别为(206.27±58.10)μg/L、(230.47±39.61)μg/L和(208.37±40.66)μg/L。结论:h UC-MSCs与正常人全血在改良Chandler Loop内共循环1 h可模拟血液介导即刻炎症反应(instant blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR),大量损耗MSCs和血液成分,导致C3a上升。NAA可抑制IBMIR、降低血液成分的损耗、提高h UC-MSCs的存活率,提示NAA能减轻MSCs的输注损伤。     

连续传代培养对hUC-MSCs上NLR家族mRNA表达的影响*

 目的：探讨连续传代培养对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）表达NOD样受体（NLR）家族所有23个成员mRNA的影响,为改进hUC-MSCs传代培养质量与增加hUC-MSCs在实验和临床应用中的数量及安全性寻找切入途径。方法：取剖宫产无菌新生儿脐带,经胶原酶II消化结合贴壁选择分离纯化hUC-MSCs,并连续传代培养;采用流式细胞术、诱导分化和RT-qPCR对连续培养传代前后的hUC-MSCs（第3和28代）进行鉴定并对23个NLR家族成员mRNA的表达进行定量分析。结果：连续传代培养前后hUC-MSCs的细胞表型均为CD29+/CD44+/CD105+/CD31-/CD34-/CD40-/CD45-/CD106-/HLA-DR-,能被诱导为成骨和脂肪细胞,符合国际细胞治疗协会建议的MSCs基本特征。全部NLR家族成员的mRNA在培养第3代hUC-MSCs上均有表达,且NOD1、NLRC4、NLRC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表达,其余成员低表达。培养传代至第28代除NLRP10 的mRNA表达上升、NLRC5和NLRX1 mRNA表达基本不变外,其余成员的mRNA表达均有所下降,其中NLRP1 mRNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论：体外连续传代培养对hUC-MSCs表达NLR家族成员的影响是多向性的。这些影响与MSCs的增殖、分化及其免疫调节功能的联系有待进一步实验探讨。     

脐血与成人外周血粒细胞Toll样受体表达的比较

 目的：比较脐血与成人外周血粒细胞Toll样受体（TLRs）的表达情况,为新生儿相关疾病的临床治疗积累实验资料。方法：取脐血和成人外周血,用密度梯度离心结合红细胞裂解法分离、收集粒细胞,流式细胞术鉴定粒细胞纯度,RT-qPCR检测TLRs 10个成员的mRNA表达水平,流式细胞术测定部分TLRs的蛋白荧光强度。结果：（1）流式细胞术检测结果：采用密度梯度离心结合红细胞裂解法分离收集的脐血粒细胞CD19-CD24+为（95.66±1.73）%,CD3+为（4.27±1.22）%,成人外周血粒细胞CD19-CD24+为（95.48±2.13）%,CD3+为（4.82±1.07）%。（2）RT-qPCR结果显示：脐血粒细胞和成人外周血粒细胞TLR1（0.141±0.091 vs 0.691±0.447）、TLR2（0.388±0.337 vs 0.901±0.508）、TLR4(0.093±0.071 vs 0.254±0.147)、TLR6(0.056±0.045 vs 0.202±0.034)、TLR7(0.001±0.001 vs 0.004±0.003)和TLR8(0.046±0.040 vs 0.211±0.146）的表达差异有统计学意义（P<0.01）,TLR3、TLR5、TLR9和TLR10的表达差异无统计学意义(P>0.05);其中TLR3、TLR7和TLR9在脐血和成人外周血粒细胞的相对表达水平均较低。（3）流式分析显示脐血与成人外周血粒细胞TLR2平均蛋白荧光强度（21.40±3.09 vs 30.50±5.69）差异有统计学意义（P<0.05）;而TLR4平均蛋白荧光强度差异无统计学意义（P>0.05）。结论：脐血粒细胞TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA及TLR2蛋白表达低于成人外周血粒细胞,提示新生儿粒细胞识别细菌性病原微生物感染的能力可能存在缺陷或尚未完全成熟。这是否与新生儿急性细菌性毒血症发病及病死率较高有直接联系,有待进一步研究。     

下调RALA表达抑制人白血病K562细胞迁移和侵袭

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测...     

siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 猴白血病病毒癌基因同系物A(RALA)基因表达对人慢性粒细胞性白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法: 利用Lipofectamine^TM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RALA siRNA对K562细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测RALA siRNA对K562细胞存活率的影响;real-time PCR检测RALA mRNA表达水平;Western blotting检测RALA蛋白表达水平;annexin V/PI双染流式 细胞仪检测RALA siRNA对K562细胞凋亡的影响;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果: RALA siRNA可明显抑制K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达(P<0.05);与阴性对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示转染RALA siRNA的K562细胞凋亡较阴性对照组显著增加(P<0.05);Hoechst 33258染色见转染RALA siRNA的K562细胞出现典型的凋亡形态学变化。结论: 癌基因RALA在白血病发生发展过程中发挥重要作用。siRNA下调RALA mRNA和蛋白的表达,可抑制人白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示RALA可能是白血病治疗的新靶点。